PIpetty电动移液器在动物布鲁氏菌病检测
（虎红平板凝集试验RBT）中的应用
     方 案 摘 要 ：

     动物布鲁氏菌病危害畜牧业与公共卫生，虎红平板凝集试验（RBT）是重要筛查手段，但传统手动移液易产生误差。本方案应用 Pipetty 电动移液器开展 RBT 检测，利用其高精度活塞系统精准移取试剂，借连续分液功能提升检测效率。通过对比使用前后检测准确性、重复性与耗时等指标评估效果，预期降低假阳性、假阴性率，缩短大规模样本检测时间，为疫病防控提供可靠技术支持。

 
  方 案 详 情 ：
  一、实验原理
      RBT是目前国内外应用最广泛的布鲁氏菌病抗体检测筛选方法之一，该方法经济、简单快速、易操作，可人工判读，也可通过与人工判读比对等效的仪器判读。WOAHISS 或国家标准血清稀释，与抗原进行 RBT 试验。标准血清 1：45 稀释应观察到凝集，呈阳性反应，标准血清1：55稀释时观察不到凝集，呈阴性反应。

二、‌实验准备

1、设配和材料

① Pipetty电动移液器5-1000 μL及无菌枪头。
② 混匀棒、计时器。
③ 反应板。
  2、试剂和材料 ① 布鲁氏菌虎红平板凝集试验抗原。
② 布鲁氏菌阳性对照血清和阴性对照血清。
 
三、实验步骤

1、在每次开始检测样品前，应用阳性对照血清和阴性对照血清分别与抗原进行反应，以确保试验条件适于检测。
2、将待检血清和抗原从冰箱取出，平衡至室温（22 ℃±4 ℃）。
3、使用Pipetty自动混匀功能轻轻混匀待检血清后，设置连续分液模式，单次分液30μL，次数可按实验需求设置，等量加到反应板上。

 
4、轻轻混匀抗原，在每份血清旁等量滴加30μL等量抗原。
5、立即将血清与抗原混合（每个样品用一个干净的混匀棒），混合成直径约2cm的圆形或椭圆形。
 
6、 双手端起反应板，按不同方向轻轻摇晃反应板，室温（22 ℃±4 ℃）下作用4min后，在自然光或强灯光下立即观察凝集情况。
注：检测山羊和绵羊血清时，待检血清与抗原的比例调整为3：1（如75μL血清：25μL抗原）能提高其检测灵敏性。

四、结果判定

1、凝集反应程度分为5个等级：

a） ++++：出现大的凝集片或颗粒，凝集块间液体完全清亮透明;
b） +++：有明显凝集颗粒，凝集块间液体几乎清亮透明;
c） ++：有较明显凝集颗粒，凝集块间液体稍清亮透明;
d） +：有微弱凝集，凝集物间液体浑浊;
e） -：无凝集，反应混合液均匀浑浊。
 
2、同时满足下列条件，判定试验条件成立：
a）阳性对照血清出现“++”及以上凝集现象;
b）阴性对照血清无凝集“-”。
 
3、符合上述条件，结果判定如下：
a）待检血清出现“+”及以上凝集现象时，判定为阳性;
b）待检血清出现“-”时，判定为阴性。