方案摘要：本方案主要探讨 PIpetty 电动移液器在基孔肯雅病毒核酸间接免疫荧光法（IFA）检测中的具体应用。这款移液器拥有轻便小巧的特点，重量仅 75g，操作起来十分舒适。同时，它具备高精度的等量连续分液能力，能够按照设定的移液量进行多次重复排液，并且配备了温度控制功能，可避免因手部热量影响而导致的精度降低。在检测流程里，无论是，样本稀释还是连续加样等关键步骤，该移液器都能发挥积极作用，有效提高检测效率与准确性，减少实验过程中的误差，为基孔肯雅病毒的检测工作提供坚实可靠的支持。

方案详情：
一、实验原理
       IFA就是先用待检血清中的特异抗体（第一抗体）与固定在玻片上的CHIKV抗原反应，如果血清中存在CHIKV特异性IgM和IgG抗体，就会与荧光标记的抗人IgM和IgG抗体（第二抗体）结合，荧光显微镜下可见有特异荧光。
 
 
二、‌实验准备
1、设配和材料
① Pipetty电动移液器MSIC01-03-250、MSIC01-02-1000及灭菌吸头；
② 荧光显微镜；
③ CHIKV抗原片（可用BHK-21、Vero 或 C6/36 等感染细胞制备，低温、干燥、密封保存）；
④ 盖玻片。

2、试剂和材料
① CHIKV抗体阳性对照血清、阴性对照血清；
② 荧光素标记抗人 IgG和IgM 荧光抗体；
③ 待检患者血清标本；
④ 样品稀释液；
⑤ 磷酸盐缓冲液（PBS，pH7.2）；
⑥ 吐温 20。

三、实验步骤
1、取出抗原片，平衡至室温；
2、如果检测 IgG 抗体，先用标本稀释液稀释待检血清，使用Pipetty电动移液器的单次移液和自动混匀功能，从1∶10 开始，快速的倍比稀释至所需要的滴度；

3、使用Pipetty电动移液器，设置连续分液模式，每孔50μL加到每个反应区域（标本量以覆盖所有反应区为准），同时设置阳性对照（按说明书稀释）、阴性对照（同比例稀释的阴性血清）和空白对照（仅加 PBS）；

4、将加有标本的抗原片放置在湿盒内，37℃温箱孵育 30min；
5、用含 2% 吐温 20 的 PBS 冲洗抗原片，然后再漂洗 5 min；
6、取出抗原片，用吸水纸从抗原片背面和侧面擦去洗液（不得擦拭反应区域），加入适量的荧光素标记抗人 IgM 或 IgG 荧光抗体，分别用于检测IgM 或IgG 抗体（荧光抗体在使用前须根据说明书用 PBS 稀释）；
7、将抗原片放置在避光的湿盒内，37℃温箱孵育 30 min；
8、用含 2% 吐温20 的 PBS 冲洗抗原片，再将抗原片放入含有1：8000 伊文思蓝的吐温 20的PBS中漂洗 5 min；
9、取出抗原片，用吸水纸从抗原片背面和侧面擦去洗液（不得擦拭反应区域），用甘油缓冲液封片，盖上盖玻片，避免产生气泡；
10、荧光显微镜下观察结果。
四、结果判读
1、特异性荧光颗粒在镜下呈现黄绿色，如果抗原片的细胞胞浆中呈现出均匀的颗粒状荧光，可判断 CHIKV 特异抗体阳性。
2、根据荧光光亮度和阳性细胞在细胞总数中所占的比例可将荧光反应大致区分为“+~ ++++6）无特异荧光者为阴性。检测抗体滴度时，抗体滴度为特异荧光达“++”时最高血清稀释度的倒数。
3、如果阳性对照显示非特异性荧光或阴性对照显示清晰的荧光，试验则不成立，需重复检测。