细胞培养中的污染鉴别与防治策略总结_abio生物试剂品牌网
细胞污染是细胞培养过程中常见的问题，可能会产生多种严重后果。细胞培养中的污染主要包括细菌、真菌、霉菌、支原体和黑胶虫等类型。不同类型的污染有不同的特征和处理方法。以下是列举的几种污染的常见类型：
1、细菌污染
细菌污染是细胞培养中最常见的污染类型，因其生长迅速，肉眼和显微镜下均较易识别。细菌污染特点通常表现为：
培养基变化：细菌污染在培养物感染后几天内就很容易被肉眼观察到；受感染的培养物通常会发黄并变得浑浊，经常还会出现培养基的pH值突然下降的情况。
显微镜观察：细菌污染的细胞在显微镜下呈现黑色细条沙状，细菌的直径通常只有几微米，其形状多样，如球状、杆状和螺旋状等。在低倍显微镜下，细菌以细小颗粒的形式出现在细胞之间，在高倍显微镜下观察可以分辨出单个细菌的形状。
异味：伴随异样气味，有时表面会有一层薄膜。
对细胞影响：细菌污染的细胞生长速度缓慢，形态逐渐变圆直至死亡。
处理措施：
丢弃污染的细胞：一旦发现细菌污染，丢弃污染的细胞，避免进一步扩散。
环境清理：对细胞房（中乔新舟细胞房抑菌剂货号：CSP011）、培养箱（中乔新舟培养箱抑菌剂货号：CSP092）、培养箱水盘（中乔新舟培养箱水盘抑菌剂货号：CSP091）、水浴锅（中乔新舟水浴锅抑菌剂货号：CSP010）、超净台和实验器具进行彻底消毒，使用75%酒精擦拭表面，必要时使用紫外线照射。
2、真菌污染
真菌污染比细菌污染更难早期发现，因为培养基通常保持清亮透明，培养液一般不会变浑浊，但在显微镜下可以观察到各种形状的菌丝。低倍镜下很容易观察到苗丝，如丝状、管状、树枝状或链球状等。培养液中通常会有肉眼可见的絮状物。真菌污染后，细胞的生长速度会减慢，形态发生变化高倍镜下可以见到链状排列的菌珠污染严重时肉眼可见白色或黄色漂浮物。
处理措施:
1）丢弃污染细胞：即使细胞株珍贵，也建议立即丢弃，避免污染扩散。
2）全面消毒：对细胞房（中乔新舟细胞房抑菌剂货号：CSP011）、培养箱（中乔新舟培养箱抑菌剂货号：CSP092）、培养箱水盘（中乔新舟培养箱水盘抑菌剂货号：CSP091）、水浴锅（中乔新舟水浴锅抑菌剂货号：CSP010）、超净台和实验器具进行彻底消毒，使用75%酒精或抗真菌溶液（中乔新舟抗真菌溶液货号：CSP032）擦拭表面，必要时使用紫外线照射。并更换培养箱水盘中的水，加入适量硫酸铜以抑制真菌生长。
3、霉菌污染
霉菌污染与真菌污染类似，早期难以察觉。特征包括：
培养基变化：出现絮状杂质，镜下可见细丝状团状漂浮物。多数来自实验服，并且具有季节性，像现在这种长蘑菇的季节很容易污染这种菌类。
细胞影响：细胞生长缓慢，状态变差，最终停止增殖。
霉菌污染的处理需格外谨慎：
丢弃污染细胞：不要尝试挽救，以免污染扩散到其他细胞株。
环境消毒：使用75%酒精彻底擦拭培养箱和超净台。对细胞房（中乔新舟细胞房抑菌剂货号：CSP011）、培养箱（中乔新舟培养箱抑菌剂货号：CSP092）、培养箱水盘（中乔新舟培养箱水盘抑菌剂货号：CSP091）、水浴锅（中乔新舟水浴锅抑菌剂货号：CSP010）、超净台和实验器具进行彻底消毒，必要时使用紫外线照射。
预防措施：定期更换培养基和血清，保持实验环境的低湿度，减少霉菌滋生。
4、支原体污染
支原体污染是细胞培养中最难检测的污染类型之一，因其不引起明显浑浊或pH变化。
显微镜观察：显微镜下无法观察到；
细胞影响：细胞生长速度明显减慢，形态变得瘦长，出现“拉丝”现象，背景出现“小黑点”
检测与处理措施：
检测方法：使用PCR检测或支原体检测试剂盒（中乔新舟支原体快速检测试剂盒（LAMP）货号：CSP218和支原体检测试剂盒货号：ZQ505-K）确认污染。
处理方法：
· 对于普通细胞株，建议直接丢弃。
· 对于珍贵细胞株，可尝试使用支原体清除试剂（中乔新舟支原体清除剂（升级版）货号：CSP037）2个月可清除，但需严格监控处理后的细胞状态。
预防措施：定期检测细胞株，保持无菌操作，如果担心支原体污染可以提前预防（中乔新舟支原体高效预防试剂（200X）货号：CSP201），使用高质量培养基和血清。
5、黑胶虫污染：
黑胶虫污染在细胞培养中较为特殊，早期对细胞影响较小，但数量增加后会显著干扰细胞生长。特征包括：
显微镜观察：黑胶虫在显微镜下呈现为黑色颗粒状或片状，通常在高倍镜下观察时，这些黑色颗粒会进行“布朗运动”。
培养基变化：培养液不会变得浑浊，但随着培养时间的延长，小黑点的数量会逐渐增多。更换培养液或清洗细胞无法去除这些小黑点。但细胞状态逐渐恶化。
处理措施：
专用清除剂：用黑胶虫清除试剂盒（中乔新舟黑胶虫清除试剂（200X）货号：CSP093和黑胶虫清除试剂（2000X）CSP214）可以去除。专门针对黑胶虫的杀灭和抑制，效果显著且对细胞无明显毒性。
环境清洁：对培养箱和实验器具进行彻底消毒，防止黑胶虫再次滋生。
1、细菌污染
细菌污染是细胞培养中最常见的污染类型，因其生长迅速，肉眼和显微镜下均较易识别。细菌污染特点通常表现为：
培养基变化：细菌污染在培养物感染后几天内就很容易被肉眼观察到；受感染的培养物通常会发黄并变得浑浊，经常还会出现培养基的pH值突然下降的情况。
显微镜观察：细菌污染的细胞在显微镜下呈现黑色细条沙状，细菌的直径通常只有几微米，其形状多样，如球状、杆状和螺旋状等。在低倍显微镜下，细菌以细小颗粒的形式出现在细胞之间，在高倍显微镜下观察可以分辨出单个细菌的形状。
异味：伴随异样气味，有时表面会有一层薄膜。
对细胞影响：细菌污染的细胞生长速度缓慢，形态逐渐变圆直至死亡。
处理措施：
丢弃污染的细胞：一旦发现细菌污染，丢弃污染的细胞，避免进一步扩散。
环境清理：对细胞房（中乔新舟细胞房抑菌剂货号：CSP011）、培养箱（中乔新舟培养箱抑菌剂货号：CSP092）、培养箱水盘（中乔新舟培养箱水盘抑菌剂货号：CSP091）、水浴锅（中乔新舟水浴锅抑菌剂货号：CSP010）、超净台和实验器具进行彻底消毒，使用75%酒精擦拭表面，必要时使用紫外线照射。
2、真菌污染
真菌污染比细菌污染更难早期发现，因为培养基通常保持清亮透明，培养液一般不会变浑浊，但在显微镜下可以观察到各种形状的菌丝。低倍镜下很容易观察到苗丝，如丝状、管状、树枝状或链球状等。培养液中通常会有肉眼可见的絮状物。真菌污染后，细胞的生长速度会减慢，形态发生变化高倍镜下可以见到链状排列的菌珠污染严重时肉眼可见白色或黄色漂浮物。
处理措施:
1）丢弃污染细胞：即使细胞株珍贵，也建议立即丢弃，避免污染扩散。
2）全面消毒：对细胞房（中乔新舟细胞房抑菌剂货号：CSP011）、培养箱（中乔新舟培养箱抑菌剂货号：CSP092）、培养箱水盘（中乔新舟培养箱水盘抑菌剂货号：CSP091）、水浴锅（中乔新舟水浴锅抑菌剂货号：CSP010）、超净台和实验器具进行彻底消毒，使用75%酒精或抗真菌溶液（中乔新舟抗真菌溶液货号：CSP032）擦拭表面，必要时使用紫外线照射。并更换培养箱水盘中的水，加入适量硫酸铜以抑制真菌生长。
3、霉菌污染
霉菌污染与真菌污染类似，早期难以察觉。特征包括：
培养基变化：出现絮状杂质，镜下可见细丝状团状漂浮物。多数来自实验服，并且具有季节性，像现在这种长蘑菇的季节很容易污染这种菌类。
细胞影响：细胞生长缓慢，状态变差，最终停止增殖。
霉菌污染的处理需格外谨慎：
丢弃污染细胞：不要尝试挽救，以免污染扩散到其他细胞株。
环境消毒：使用75%酒精彻底擦拭培养箱和超净台。对细胞房（中乔新舟细胞房抑菌剂货号：CSP011）、培养箱（中乔新舟培养箱抑菌剂货号：CSP092）、培养箱水盘（中乔新舟培养箱水盘抑菌剂货号：CSP091）、水浴锅（中乔新舟水浴锅抑菌剂货号：CSP010）、超净台和实验器具进行彻底消毒，必要时使用紫外线照射。
预防措施：定期更换培养基和血清，保持实验环境的低湿度，减少霉菌滋生。
4、支原体污染
支原体污染是细胞培养中最难检测的污染类型之一，因其不引起明显浑浊或pH变化。
显微镜观察：显微镜下无法观察到；
细胞影响：细胞生长速度明显减慢，形态变得瘦长，出现“拉丝”现象，背景出现“小黑点”
检测与处理措施：
检测方法：使用PCR检测或支原体检测试剂盒（中乔新舟支原体快速检测试剂盒（LAMP）货号：CSP218和支原体检测试剂盒货号：ZQ505-K）确认污染。
处理方法：
· 对于普通细胞株，建议直接丢弃。
· 对于珍贵细胞株，可尝试使用支原体清除试剂（中乔新舟支原体清除剂（升级版）货号：CSP037）2个月可清除，但需严格监控处理后的细胞状态。
预防措施：定期检测细胞株，保持无菌操作，如果担心支原体污染可以提前预防（中乔新舟支原体高效预防试剂（200X）货号：CSP201），使用高质量培养基和血清。
5、黑胶虫污染：
黑胶虫污染在细胞培养中较为特殊，早期对细胞影响较小，但数量增加后会显著干扰细胞生长。特征包括：
显微镜观察：黑胶虫在显微镜下呈现为黑色颗粒状或片状，通常在高倍镜下观察时，这些黑色颗粒会进行“布朗运动”。
培养基变化：培养液不会变得浑浊，但随着培养时间的延长，小黑点的数量会逐渐增多。更换培养液或清洗细胞无法去除这些小黑点。但细胞状态逐渐恶化。
处理措施：
专用清除剂：用黑胶虫清除试剂盒（中乔新舟黑胶虫清除试剂（200X）货号：CSP093和黑胶虫清除试剂（2000X）CSP214）可以去除。专门针对黑胶虫的杀灭和抑制，效果显著且对细胞无明显毒性。
环境清洁：对培养箱和实验器具进行彻底消毒，防止黑胶虫再次滋生。
