如何为不同应用场景选用不同灵敏度的支原体检测试剂盒!_abio生物试剂品牌网

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支原体检测是细胞培养和相关生物制品的重要质控方案,但不同的应用场景需要选用不同的检测试剂盒。试剂盒的选择主要考虑几个因素:

1、质控的等级要求;
等级要求最高的,是细胞与基因治疗产品的最终检测,成品检测或放行检。可选高灵敏度检测试剂盒,需要极高的检测灵敏度,至少达到10CFU/每剂,特异性要求也最高,必须无假阳性,假阴性。相对应地,样本需要经过复杂的前处理过程,包括支原体富集,核酸抽提,然后采用高灵敏度QPCR检测试剂(扩增45个循环,阳性阈值定为40个循环)。高灵敏试剂对整个实验操作对环境和操作过程要求高,稍有疏漏,会出现假阳性或扩增曲线翘尾。

对于细胞和基因治疗产品中间研发过程的质控,等级要求可以适当放宽,灵敏度在100-10CFU是可以被接受的,并且很多情况下为了简化操作,往往采取直扩的方案,即直接在QPCR体系中加入细胞上清或悬浮液进行检测(扩增40个循环,阳性阈值定为35个循环);若想进一步提高灵敏度可采取浓缩裂解的
方案,即细胞上清通过高速离心后去掉上清,加入裂解液处理。

对于科研细胞房使用,可选用科研版直扩检测法,扩增35个循环,阳性阈值定为32个循环,实验对环境无菌要求不高,相应地,灵敏度要求也不高,直接上清加样,不需要对样本特殊处理,灵敏度在1000-100CFU,如若要节约成本,可采取混和样本检测。

2、经济成本;
高灵敏QPCR检测试剂盒,需要进行样本抽提,灵敏度高,需要配备荧光定量pcr仪,成本高;直扩QPCR检测试剂盒,不需要抽提和特殊样本前处理,灵敏度中等,成本中等;科研版支原体检测试剂盒,可混样检测,成本较低。

3、操作的复杂程度
高灵敏QPCR检测法需要浓缩,抽提样本,可批量操作,操作难易程度中等,对实验人员有一定的要求,操作时间4-8小时;直扩QPCR检测法和科研版直扩法,操作比较简单,只需要加样上机即可,操作时间1-3小时即可。

结合以上因素,总结如下:
高灵敏度:高灵敏支原体QPCR检测试剂盒(成品放行检,提高速率,但成本中等)。
快速便捷:直扩支原体QPCR检测试剂盒(平衡速度与成本,设备要求低,适合中间质控环节)。
成本至上:科研版支原体检测试剂盒(节约成本,适合科研细胞实验室)。

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