活体荧光多重成像分析可以对小动物活体状态下的生物过程进行组织、细胞和分子水平的定性和定量研究，是辅助科研人员理解疾病发生机制、进行药物研发和临床精确诊断的重要技术。然而在实际应用中，该技术仍面临着成像深度浅、分辨率差、对比度低和可检测通道数量少等诸多挑战，其中缺乏光谱分离的近红外荧光探针是制约这一技术进步的重要因素。

         实现近红外光谱分离的关键在于构筑窄带吸收、发射以及大斯托克斯位移的近红外荧光团。当前使用的荧光探针普遍光谱较宽，吸收发射挨的近，因而无法对生物组织进行无串扰的多重标记与成像。稀土铒离子配合物具有1530 nm左右的特征单色发光特性，理论上非常适合用来进行活体荧光成像研究。然而要在生理环境下实现这一发光却并不容易。传统的分子构建策略不仅容易导致铒离子的发光被水分子淬灭，而且分子的激发波长常常在紫外光区，无法在活体成像中进行应用。

         研究人员发现自然界中的紫细菌能够利用细菌叶绿素高效地捕捉近红外光并将光能转换为化学能。受此启发，团队提出了以细菌叶绿素作为天线配体敏化稀土铒离子的新颖策略，所构造出的荧光探针不仅能在水相中发射出明亮的近红外荧光，而且其吸收和发射半峰宽小于32 nm，斯托克斯位移值达到了760 nm，为活体荧光多重成像的实现提供了强有力的研究工具。

研究团队利用超快瞬态吸收技术和低温磷光光谱对络合物中能量传递机理进行研究，揭示了细菌叶绿素和铒离子之间快速的能量传递速率（2×10 ⁹ s ^-1）和高效的能量传递效率（Φ _TEnT> 99.9%) 。并且进一步通过分子工程调控了配体的吸收，验证了围绕铒-细菌叶绿素体系开发多色可调近红外荧光探针工具的可行性。
   
  图1：（a）铒-细菌叶绿素配合物的能量传递机理图；
（b）铒-细菌叶绿素配合物的代表性分子EB766的化学结构式；
（c）EB766的单晶结构；
（d）EB766的吸收和发射光谱图；
（e）超快瞬态吸收光谱表征EB766的激发态动力学过程。            最后，研究团队基于探针优异的光学特性和生物相容性进行了生物成像研究。探针较窄的吸收光谱特性使得通过正交激发控制的多重成像方法可以清晰地勾勒出小鼠血管和淋巴管的精细结构及其空间位置关系，并能实时显现胃肠道消化系统和血液循环系统的代谢活动。该方法有望为手术导航和临床诊断提供更精准的信息。团队进一步利用新型探针标记了小鼠体内的癌细胞，探针较窄的发射光谱特性也让正交发射控制的多重成像方法得以在小鼠脑部以无创伤的方式清晰地观察到癌细胞的运动、迁移、以及在血管壁上驻扎等过程。相比于原先的研究方法，这种方法有效地避免了开视窗造成的组织损伤，以及昂贵的成像设施，为活体水平的细胞相互作用研究提供了新的研究平台。
             图2：（a-c）基于新型近红外荧光探针构建的激发光谱分离多重成像方案，
实现了小鼠血管和淋巴管结构的高分辨率成像；
（d-g）基于新型近红外荧光探针构建的发射光谱分离多重成像方案，
实现了癌细胞在小鼠脑部转移的动态实时可视化观察。  
参考文献：
Ting Wang+, Shangfeng Wang+*, Zhiyong Liu+, Zuyang He, Peng Yu, Mengyao Zhao, Hongxin Zhang, Lingfei Lu, Zhengxin Wang, Ziyu Wang, Weian Zhang*, Yong Fan, CAIxia Sun, Dongyuan Zhao, Weimin Liu, Jean-Claude G. Bünzli and Fan Zhang*. A hybrid erbium(III)–bacteriochlorin near-infrared probe for multiplexed biomedical imaging. Nature Materials, 2021, 20, 1571–1578.

| 仪器推荐  
近红外二区小动物活体成像系统NIR-II-ST
NIR-II in vivo imaging system
           文中利用近红外二区小动物活体成像系统NIR-II-ST完成了体内淋巴管和血管的多重成像以及小鼠脑内癌细胞转移的活体多重成像实验。这款小动物活体成像系统性能优越，可搭配多款深度制冷的InGaAs近红外相机，检测灵敏度高，能够实现大视野及局部小动物高信噪比和高分辨活体成像。配备全自动操作平台，可实现电动对焦，多通道小动物麻醉系统，满足多只小鼠同时成像。成像系统采用模块化设计，可选配多波长激光器、X射线、可见和近红外LED等多种激发光源，实现成像功能升级拓展。 自主开发的软件功能一键操作，可实时反映仪器状态，自动化控制，操控与图像处理一体化。该系统可应用于活体小动物荧光手术导航、血管动态成像、淋巴成像、肿瘤成像、炎症的检测与监测、药物追踪与活体原位疾病检测等。