方案摘要：本方案聚焦 PIpetty 电动移液器在基孔肯雅病毒核酸检测（IgM 抗体捕获酶联免疫吸附试验）中的应用。该移液器重量轻、体积小，重量仅 75g，操作舒适。它具备高精度等量连续分液功能，能以设定移液量多次重复排出。还配备温度控制功能，可防止手热导致精度下降。在检测流程的包被抗体分液、样本稀释加样等关键环节，其可有效提升检测效率与准确性，降低实验误差，为基孔肯雅病毒检测提供可靠助力 。
 
方案详情：
一、实验原理
      首先用抗人IgM μ链抗体(捕获抗体)包被96孔板，如果待检血清中存在CHIKV抗IgM抗体，则与包被的捕获抗体结合，然后再与CHIKV抗原结合，最后与加入酶标抗CHIKV抗体结合，酶与显色底物相互作用就会出现显色反应。
 
二、‌实验准备
1、设配和材料
① 包被液：碳酸钠/碳酸氢钠缓冲液，pH 9.6，1.59g Na2C03，和 2.93g NaHC03溶解于1L水中;
② 洗液：磷酸盐缓冲液(PBS)，含0.05%吐温20，pH7.2;
③ 封闭液：含5%奶粉和 0.05%吐温 20的 PBS；
④ 包被抗体：抗人IgMμ链抗体；
⑤ 病毒抗原：灭活的纯化 CHIKV 抗原，无感染性；
⑥ 细胞抗原：经纯化的未感染病毒细胞培养液；
⑦ 酶标抗体：辣根过氧化物酶标记的 CHIKV单克隆抗体；
⑧ 酶底物：TMB；
⑨ 终止液：2N H2S04；
⑩ 临床标本：急性期病人血清和/或脑脊髓液标本；阳性和阴性血清对照。
 
1、试剂和材料
① 平底 96 孔板。
② 洗板机。
③ 酶标仪。
④ 恒温箱。
⑤ Pipetty电动移液器MSIC01-02-1000及灭菌吸头。
⑥ 试剂储液槽。
⑦ 保鲜袋。
⑧ 吸水纸。
 
三、实验步骤
1、用记号笔在酶标板上标记实验编号，明确每份临床标本的位置。
2、用 pH 9.6的包被液按1∶2 000 比例稀释抗人 IgMμ 链抗体，使用Pipetty电动移液器，设置连续分液功能，按 75 μL/孔等量加入到 96 孔板的孔中，4℃孵育过夜。
 
3、倒掉抗体包被液，把板中剩余液体在吸水纸上吸干。使用连续分液功能，每孔加入封闭液 200μL，封闭反应板。室温孵育 30 min。
4、用洗液在自动洗板机上洗板5次。每次洗涤要保证每孔加满洗液。
5、病人血清用稀释液进行 1∶100 稀释，脑脊髓液进行 1：10 稀释，然后按 50 μL/孔，使用连续分液功能，各加2孔，同时用稀释液按1∶100比例稀释阳性对照血清和阴性对照血清，各加2孔。37℃湿盒孵育1h。洗涤5遍。
6、稀释病毒抗原和细胞抗原。使用连续分液功能，每排左边1孔按 50μL /孔加入病毒抗原，更换吸头，每排右边1孔按 50 μL/孔加入细胞抗原，4℃湿盒孵育过夜。洗涤5遍。
7、按 50 μL/孔加入辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体，37℃湿盒孵育1h，洗板5遍。
8、所有孔中加 50 μL/孔的 TB 底物液，包括1孔未加样的空白对照孔。避光室温孵育 10 min。抗体阳性的孔中会逐渐显示出蓝色。
9、所有孔中加 50 μL/孔的终止液，显示蓝色的孔此时会变成黄色。把酶标板放入酶标仪中，在450 nm 波长处读取 OD 值。
四、结果判读
1、如果阳性对照血清病毒抗原孔的光密度(OD)值与细胞抗原孔的 0D 值之比≥2.1，检测结果有效;
2、如果待检标本病毒抗原孔的 0D 值与细胞抗原孔的 0D 值之比≥2.1，则可判定待检标本中 CHIKV IgM 抗体阳性。