合法和非法阿片类药物使用日益普遍，导致越来越多胎儿发育过程中接触这些药物，这一现象令人担忧。因为85%的阿片类药物暴露儿童随着年龄增长会面临各种行为挑战，包括情绪、认知和社交缺陷。推荐的阿片类药物依赖治疗方法是使用治疗阿片类药物使用障碍(MOUD)的药物，例如methadone或buprenorphine，在孕期也可以使用。然而，methadone和buprenorphine可能会干扰胎儿的神经发育过程，导致不良的行为后果。

本研究旨在探讨妊娠期母亲methadone或buprenorphine暴露对后代雌雄幼年游戏行为和成年社交行为的代际影响，采用孕期母鼠(F0)暴露于MOUD后如何影响幼鼠和成年鼠第一代 (F1)和第二代(F2)的社交行为测试研究。

材料与方法
将59只雌性大鼠随机分配到三个不同的暴露组：methadone、buprenorphine或对照组。每日对大鼠分别输送10 mg/kg/天methadone和1 mg/kg/天buprenorphine或无菌水。除去死亡和未能成功交配的大鼠，总共有45只雌性（14 只对照、15 只methadone和 16 只buprenorphine）被纳入作为F1代的母亲。F1代大鼠完成行为学测试并达到15周龄后，用于繁殖F2代。共36只雌性和36只雄性F1代大鼠用于繁殖，分为12对对照组、11对methadone组和13对buprenorphine组。

社交游戏行为和超声波发声
在胎龄27-34周时，进行社交游戏行为测试。将每只大鼠与来自另一个笼子、性别和年龄匹配的陌生伙伴配对，一起放在测试笼中15分钟。使用行为观察记录分析系统(The Observer XT)对每对动物的游戏行为进行手动评估。量化了与游戏相关的行为（猛扑、压制和拳击）的次数，以及用于社交和非社交探索的时间（表1）。在游戏过程中，使用连接到声音行为分析系统(UltraVox XT)的超声波麦克风记录超声波发声(USV)。对前5分钟内频率在20至80 kHz之间的所有叫声进行手动计数和分类（表2）。
 

表1
  表2

三室社交互动测试
10周龄时，对子代大鼠进行三室社交互动测试。测试装置是一个有机玻璃盒，由带有开口的玻璃分成三个大小相等的隔间。左右两室的隔间中央各有一个铁丝笼，用于饲养新来的大鼠。测试包括三个阶段：习惯化（5 分钟）、社交性测试（10 分钟）和社交新奇性测试（10 分钟）。在习惯化阶段，将大鼠放置在中央隔间中，左右隔间的开口关闭。在社交性阶段，将一个新的同性同种动物放置在侧隔间的一个笼中，作为“社交刺激”，而位于另一侧隔间的空笼则作为“非社交刺激”。隔板被抬起，允许大鼠在装置的三个隔间中自由移动。在社交新奇阶段，将第二个新的同性同种动物放置在空笼中。在社交性阶段引入的同种动物现在作为“熟悉刺激”，而新的同种动物作为“新奇刺激”。使用摄像机记录实验过程，并使用 动物运动轨迹跟踪系统(EthoVision XT)进行追踪。测定小鼠在社交阶段和社交新奇阶段在不同房间内停留的时间。

  结果
虽然近年来我们对产前接触 MOUD 对新生儿和幼儿影响的认识有所加深，但关于其对青少年期和成年期的影响仍然存在空白。此外，阿片类药物引起的代际传播的影响尚未引起足够的重视。因此，本文旨在研究母体（F0）接触methadone或buprenorphine后，F1和F2代雄性和雌性大鼠后代的幼年游戏行为和成年社交互动。

产前暴露于buprenorphine的幼鼠（F1）表现出社交游戏行为减少，表现为猛扑和压制次数减少（图1A-B），而猛扑和压制是大鼠社交游戏行为的关键特征。游戏行为的减少在雄性幼鼠中最为明显。还发现F2代幼鼠的社交游戏行为减少。F1代在产前暴露于buprenorphine，其后代表现出猛扑和压制行为减少，这与F1代的发现一致。buprenorphineF2组的雄性和雌性均表现出猛扑和压制行为减少（图2A-B）。两代幼鼠用于社交探索（例如嗅探或梳理伴侣）的时间均保持不变，表明buprenorphine特别影响与更具活力的社交行为（例如社交游戏）相关的方面。两代存在性别差异：buprenorphine暴露对F1代男性的社交游戏行为产生显著影响。在F2代中，methadone暴露父母的男性子女在社交探索上花费的时间显著少于对照组，表明他们对社交互动的兴趣降低，而女性则没有观察到任何影响。与女性相比，男性似乎更容易受到产前阿片类药物暴露的长期影响。
  图1
  图2

社交游戏中USV数据显示，暴露对F1代总叫声次数或任何叫声类型均无总体影响。成对比较显示，F1代与对照组相比，出生前暴露于buprenorphine的F1雌性发出的颤音更多（图3B，雌性）。对于社交游戏中的F2代USV，对总叫声数量没有总体影响。成对比较显示，与对照组相比，methadone组的F2动物发出了更多的颤音，而buprenorphine组的动物发出了更多的短叫声（图4B，雄性+雌性）。此外，methadone组的雄性与对照组相比发出了更多的颤音（图4B，雄性）。
 

图3
  图4

三室社交互动测试中，暴露对F1代社交性指数有总体影响，但成对比较显示阿片类药物暴露动物与对照组之间无显著差异。性别对F1代社交新颖性指数有总体影响，其中雌性动物的社交新颖性指数高于雄性动物。未发现暴露和性别之间的相互作用，并且每个性别的暴露组之间无明显差异。F2代无论是对社交性指数还是社交新颖性指数，暴露均无主效应。

总结
本文的研究首次揭示了阿片类药物使用障碍(MOUD)的代际效应。孕期接触buprenorphine（而非methadone）降低了F1代和F2代后代的社交游戏行为，表现为猛扑和压制次数减少，而猛扑和压制是大鼠社交游戏的两个最典型参数。两代成年大鼠的社交互动均未受到产前 MOUD暴露的影响。

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