充质干细胞（MSC）作为再生医学的“明星选手”，其培养质量直接决定实验成败！而培养基的选择与操作更是核心中的核心。针对高频痛点，我们整理了一份超实用指南，助你避开培养雷区！

01Q:基础培养基怎么选？DMEM/F12、α-MEM还是低糖DMEM？
A:没有绝对最优，关键看细胞来源和应用场景！
骨髓/脂肪来源MSC：经典选择α-MEM（含核苷/维生素，促增殖）
脐带/胎盘来源MSC：倾向低糖DMEM（更贴近生理微环境）
需神经/成骨分化：可选DMEM/F12（营养更均衡）

02Q:血清必须用胎牛血清（FBS）吗？能用替代品吗？
A:FBS仍是主流，但无血清培养是趋势！

重要提示
若用FBS，必须热灭活（56℃ 30min）以消除补体影响；转换无血清培养时，需梯度适配（按比例混合新旧培养基过渡）。

03Q:培养基多久换液一次？颜色变黄就要换吗？
A:看细胞密度，别只看颜色！
活跃增殖期（＜80%密度）：每2-3天换液（即使未变黄）；
高密度/静止期（＞90%）：每天换液（避免代谢废物堆积）；
急救场景（pH骤降变橙黄）：立即换液+检查CO₂浓度！
进阶技巧
换液前轻晃培养瓶，观察细胞贴附稳定性——若大量漂浮，警惕污染或消化过度！

04Q:添加剂（bFGF、EGF等）怎么加？现用现配吗？
A:生长因子必须分装冻存，避免反复冻融！
配制贴士
用含0.1% BSA的PBS溶解生长因子（减少吸附损失）；
分装单次用量（如bFGF按5-10ng/ml，每支装50μl），-80℃保存；
使用前融化后4℃暂存≤1周。

05Q:培养的MSC突然不贴壁/分化异常，是培养基的锅吗？
A:可能！但需系统排查→ 按此顺序自检：
1. 培养基：
是否新开瓶？检测pH值（正常：7.2-7.4）
添加剂是否失活？（换新批次验证）
2. 操作因素：
消化时间是否过长？（理想状态：细胞边缘卷曲即终止）
传代比例是否过低？（MSC推荐1:2~1:3，高代次勿低于1:4）
3. 环境控制：
CO₂浓度是否偏离5%？
水盘是否干涸导致湿度不足？

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上海玮驰仪器有限公司 埃泽思为代理商