一、抗体结构参数
猪瘟 E2 单克隆抗体（mAb）为典型的鼠源 IgG 类抗体（多数为 IgG1 或 IgG2a 亚型），基本结构如下：
整体结构：由 2 条重链（H 链）和 2 条轻链（L 链）通过二硫键连接形成 “Y” 型结构，分子量约 150 kDa。
功能区域：
可变区（V 区）：重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）组成抗原结合位点（CDR，互补决定区），负责特异性识别 E2 蛋白的表位（线性或构象表位）。
恒定区（C 区）：重链恒定区（CH1-CH3）决定抗体亚型（如 IgG1 的 Fc 段可与补体或细胞表面 Fc 受体结合），轻链恒定区（CL）辅助维持结构稳定。
糖基化修饰：部分单抗的 Fc 段存在 N - 糖基化位点，影响抗体的半衰期和效应功能（如补体依赖的细胞毒性，CDC）。

二、靶向的 E2 蛋白毒株
E2 蛋白是 CSFV 的主要抗原，不同毒株的 E2 序列存在一定变异，但核心表位（尤其是中和表位）相对保守。单抗靶向的常见毒株包括：
经典毒株：如 C 株（兔化弱毒疫苗株，E2 基因高度保守）、Alfort 株、Brescia 株。
流行野毒株：如国内分离的 Shimen 株、GXWZ02 株，欧洲的 Paderborn 株等。
重组毒株：通过原核（如大肠杆菌）或真核系统（如杆状病毒、CHO 细胞）表达的重组 E2 蛋白（保留天然构象表位），是单抗制备的主要免疫原来源。
注：优质单抗通常能识别多个流行毒株的 E2 蛋白（因保守表位交叉识别），但对基因高度变异的毒株可能存在识别效率差异。

三、制备流程及关键参数
1. 制备步骤
免疫原：重组 E2 蛋白（纯度≥90%，浓度 50-100μg / 剂）或灭活 CSFV（滴度≥10⁶ TCID₅₀/mL）。
免疫方案：BALB/c 小鼠腹腔或皮下免疫，基础免疫 3 次（间隔 2 周），加强免疫 1 次（融合前 3 天），血清效价需≥1:10⁴（ELISA 检测）。
细胞融合：脾脏 B 细胞与 SP2/0 骨髓瘤细胞融合，融合率≥30%，杂交瘤克隆形成率≥50%。
筛选方法：
初筛：间接 ELISA（包被重组 E2 蛋白，OD450 值≥0.8 且阴性对照 < 0.2 为阳性）。
复筛：免疫荧光（IFA，感染 CSFV 的 PK-15 细胞中出现特异性荧光）、中和试验（检测病毒中和活性）。
克隆纯化：有限稀释法克隆 3 次以上，确保杂交瘤细胞株单克隆性（染色体数目稳定，约 90-100 条）。
抗体生产：腹水诱生（效价 1:10⁵-10⁷）或无血清培养（浓度 50-200μg/mL），Protein G 亲和纯化后纯度≥95%。
2. 制备关键参数
杂交瘤细胞稳定性：连续传代 30 次以上仍能稳定分泌抗体（效价波动≤2 倍）。
抗体效价：ELISA 效价≥1:10⁶（腹水）或 1:10⁵（细胞上清）；中和效价（NT₅₀）≥1:128（针对强毒株）。

四、特异性与交叉反应率
1. 特异性
抗原特异性：仅与 CSFV E2 蛋白结合，不识别 CSFV 的其他结构蛋白（如 E0、E1）或非结构蛋白（如 NS3）。
病毒特异性：通过 IFA 或中和试验验证，仅与 CSFV 反应，不与其他猪源病毒（如猪圆环病毒 PCV、猪繁殖与呼吸综合征病毒 PRRSV）交叉反应。
2. 交叉反应率
与瘟病毒属其他病毒：因 CSFV 与牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、边界病病毒（BDV）同属瘟病毒属，部分单抗可能存在交叉（交叉率≤5% 为优质单抗），需通过 ELISA 或中和试验排除（如对 BVDV 的 OD450 值 / CSFV OD450 值 < 0.1）。
与不同 CSFV 毒株：对主流流行株（如 2.1 亚型、2.2 亚型）的识别率≥95%，对基因变异株（如部分 3.4 亚型）的交叉率可能降至 80%-90%（需通过序列比对确认表位保守性）。

五、其他关键参数
亲和力：通过表面等离子体共振（SPR）测定，解离常数（KD）通常为 10⁻⁸-10⁻¹⁰ M（KD 值越小，亲和力越高）。
热稳定性：37℃放置 7 天，效价保留率≥80%；-20℃冻存 1 年，效价无显著下降。
应用适应性：适合 ELISA、IFA、Western blot、中和试验等方法，稀释倍数范围宽（如 ELISA 工作浓度 1:5000-1:20000）。