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抗猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）单克隆抗体的制备_abio生物试剂品牌网

abiopp3个月前 (06-22)技术14

抗猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）单克隆抗体相关参数解析
一、TGEV 毒株型号区别猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）属于冠状病毒科，其毒株分型主要基于基因序列差异和抗原性差异，常见毒株类型及特点如下：

毒株类型	代表株	基因特征	抗原性特点	流行区域 / 时间
经典毒株	Purdue-115	ORF3 基因完整，S 蛋白受体结合域（RBD）保守性高	与早期疫苗株抗原匹配度高	早期北美、欧洲流行株
变异毒株	TH-98	ORF3 基因缺失（ΔORF3），S 蛋白出现氨基酸突变（如 S1 亚基 D407N 突变）	抗原性与经典毒株存在差异，可逃逸部分抗体	20 世纪 90 年代后亚洲流行株
重组毒株	China-2012	S 蛋白与猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）存在基因重组，抗原表位多样性增加	交叉反应性降低，需新型抗体识别	近年中国部分地区流行株
疫苗衍生毒株	MLV（弱毒疫苗株）	经过细胞传代致弱，S 蛋白部分抗原表位弱化，免疫原性保留但致病性降低	主要用于疫苗制备，与野毒株抗原性部分重叠	全球疫苗生产用毒株

二、单克隆抗体制备流程抗 TGEV 单克隆抗体制备通常采用杂交瘤技术，核心步骤及关键参数如下： 1. 抗原制备

抗原类型：
- 全病毒抗原（灭活或纯化 TGEV，如 Purdue-115 株）：诱导广谱抗体，但需生物安全防护（BSL-2 实验室）。
- 重组蛋白抗原（如 S 蛋白 RBD 区、N 蛋白）：安全性高，抗原表位明确，常用于特异性抗体筛选。
免疫方案：
- 动物模型：BALB/c 小鼠（6-8 周龄），腹腔注射抗原（10-50 μg / 次），佐剂（弗氏完全 / 不完全佐剂）辅助。
- 免疫周期：3-4 次基础免疫（间隔 2 周）+ 1 次加强免疫（融合前 3 天静脉注射）。

2. 细胞融合与筛选

融合步骤：
- 脾细胞（免疫小鼠）与骨髓瘤细胞（如 SP2/0）按 5:1 比例混合，PEG1500 诱导融合。
- 筛选培养基：HAT 培养基（含次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶），淘汰未融合细胞。
抗体筛选：
- 间接 ELISA：以 TGEV 抗原包被，筛选阳性杂交瘤细胞株。
- 中和试验（Neutralization Assay）：检测抗体对 TGEV 感染的中和能力（如 TCID₅₀抑制率）。
- 毒株交叉反应性测试：用不同型毒株（如经典株、变异株）验证抗体特异性。

3. 克隆化与抗体生产

有限稀释法：将杂交瘤细胞稀释至 0.5 细胞 / 孔，单克隆培养，确保单一抗体来源。
抗体生产：
- 小鼠腹腔诱生法：注射杂交瘤细胞，收集腹水，抗体浓度可达 1-10 mg/mL。
- 悬浮培养法：无血清培养基大规模培养，适合工业化生产，抗体纯度高（需亲和层析纯化）。

三、单克隆抗体特异性参数
1. 抗原识别特异性

表位类型：
- 中和表位：主要位于 S 蛋白 RBD 区（如氨基酸残基 380-440），抗体可阻断病毒与宿主细胞受体（氨肽酶 N）结合。
- 非中和表位：常见于 N 蛋白、M 蛋白，用于病毒检测（如 ELISA、免疫荧光），但无中和活性。
毒株交叉反应性：
- 经典株抗体（如针对 Purdue-115 S 蛋白）对变异株（如 TH-98）中和效率可能下降 50% 以上。
- 新型变异株抗体（如针对 China-2012 S 蛋白）需通过中和试验验证对不同毒株的交叉保护力。

2. 功能活性参数

中和效价（IC₅₀）：
- 指抑制 50% 病毒感染所需的抗体浓度，经典株抗体 IC₅₀通常为 0.1-1 μg/mL，变异株抗体可能需更高浓度（如 1-10 μg/mL）。
抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC）：
- 部分抗体可通过 Fc 段激活 NK 细胞，增强对病毒感染细胞的杀伤，需通过流式细胞术检测。

3. 应用场景特异性

四、不同毒株抗体的应用差异

抗体类型	针对毒株	中和活性	交叉反应性	主要应用
经典株特异性抗体	Purdue-115	高（对经典株）	对变异株低	早期疫苗效果评估、经典株检测
变异株广谱抗体	TH-98、China-2012	高（对变异株）	部分覆盖经典株	流行毒株诊断、新型疫苗研发
N 蛋白通用抗体	所有毒株	无中和活性	高（保守抗原）	病毒总载量检测（如 ELISA）