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单细胞悬液制备全流程介绍及相关注意事项_abio生物试剂品牌网

abiopp4个月前 (05-14)技术15

流式细胞术做为一种快速的细胞定量分析技术,能够同时对单个细胞进行多种特征参数的检测,如细胞大小、DNA含量、蛋白质表达等,现已成为科研领域中不可或缺的重要工具。

流式检测能顺利进行的硬要求之一是,样本必须能在鞘液中流动,因此,无论是培养的细胞,还是从各种组织中提取出来的细胞,都需要把待测样本制备成单细胞悬液!制备欠妥的样本,不仅会直接影响实验的准确性和结果的可靠性,一些大的细胞团块甚至会堵塞液流系统而影响仪器的正常运行。


实验过程

1、取脾脏
颈椎脱臼法处死小鼠;在解剖台上固定小鼠,从底端小心剪开小鼠整个腹部皮肤,暴露出小鼠腹膜;剪开小鼠腹膜,暴露出脾脏,摘取,并充分去除上面的脂肪组织;将取下的脾脏剪碎,置于预冷的PBS中浸泡待用

2、制备单细胞
使用净信单细胞悬液制备仪,设置参数,点击启动,程序结束后加入终止液

3、裂解红细胞
在离心后的细胞悬液中加入ACK红细胞裂解液,重悬细胞,在室温裂解5min

4、过滤洗涤
通过过滤网过滤,将过滤后的细胞悬液收集至离心管中,离心5min,去除上清液

5、单细胞计数
显微镜观察细胞,使用染色缓冲液重悬细胞调整细胞浓度,吸取细胞悬液至流式管中,准备染色

结果分析:
 

小鼠脾脏活率99%,方便后续进行流式分析。

注意事项:

1.组织尽量剪碎,消化效果更好
2.摘取脾脏后,尽可能移除黏连的脂肪组织,提高脾脏细胞的占比
3.建议使用新鲜配制的红细胞裂解液
4.消化后的细胞应洗涤干净,否则影响流式效果

单细胞悬液制备仪不仅效率高、温和,保护细胞活性,还精准可控,适应不同组织类型。高通量设计,提升实验效率,对于需要处理多个样本的研究项目,单细胞悬液制备仪的高通量设计可以同时处理多个样本,大幅缩短实验时间。选择合适的仪器,可批量制备单细胞悬液,节约了实验时间,根据需求选择仪器中人体、小鼠各个组织、器官对应程序,提高了单细胞悬液制备的活率和得率,使后续实验进行更加顺利。

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