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自动高通量法测定杉木对多回线虫的杀虫活性_abio生物试剂品牌网

abiopp8个月前 (05-13)技术53

Antihelminthic Activity of Lophira Lanceolata on Heligmosomoides polygyrus Using an Automated High-Throughput Method” 发表于Journal of TroPIcal Medicine,研究发现披针叶罗庚梅提取物对多形螺旋线虫有抗蠕虫活性,但需进一步研究其安全性和毒性。

1.研究背景:蠕虫病在非洲发展中国家流行,因缺乏关注和资金被列为被忽视的热带病。现有合成驱虫药出现耐药性、有副作用且不易获取,喀麦隆当地常用草药治疗蠕虫病。披针叶罗庚梅在传统医学中应用广泛,本研究用自动化高通量方法评估其抗蠕虫活性。

2.材料和方法

实验材料:多形螺旋线虫感染性三期幼虫由英国爱丁堡大学提供;披针叶罗庚梅叶子采自喀麦隆西部,经国家植物标本馆鉴定并编号;制备水提物和醇提物;通过浮选技术收集和浓缩虫卵,培养虫卵获取 L1 和 L2 幼虫。

实验方法:采用自动化高通量设备 WMicrotracker,进行虫卵孵化试验和幼虫运动性测定评估提取物抗蠕虫活性,同时对提取物进行植物化学成分筛选。研究遵循伦理准则,数据用 GraphPad Prism 8.0 分析,计算半数抑制浓度()评估抗蠕虫效果。

3.实验结果

水提物和醇提物对虫卵孵化率的影响:横坐标为提取物浓度及对照,纵坐标为虫卵孵化率。5mg/mL 时,水提物和醇提物孵化率分别为 5.0±5.0% 和 11.66±2.8% ,蒸馏水和 1.5% DMSO 孵化率 100%。0.3125mg/mL 和 0.625mg/mL 时,醇提物孵化率较高,分别为 65±8.6% 和 76.66±15.2%,直观展示提取物抑制虫卵孵化效果。

虫卵孵化的半数抑制浓度():横坐标为浓度对数(mg/mL),纵坐标为抑制率。醇提物IC50为1.4mg/mL ,水提物未确定,表明醇提物对虫卵孵化抑制作用更强。

水提物和醇提物对多形螺旋线虫 L1 幼虫运动抑制率:横坐标为提取物浓度及对照,纵坐标为幼虫运动抑制率。5mg/mL 时,水提物和醇提物抑制率分别为 86.66±5.77 和 96.66±6.44 ,均接近阳性对照左旋咪唑(96.67±2.88),蒸馏水和 1.5% DMSO 抑制率 0%,显示提取物对 L1 幼虫运动抑制效果及浓度依赖关系。

L1 幼虫运动的半数抑制浓度():横坐标为浓度对数(mg/mL),纵坐标为抑制率。水提物和醇提物IC50分别为 1.85mg/mL 和 2.4mg/mL,表明醇提物对 L1 幼虫运动抑制活性更强。

水提物和醇提物对多形螺旋线虫 L2 幼虫运动抑制率:横坐标为提取物浓度及对照,纵坐标为幼虫运动抑制率。5mg/mL 时,水提物和醇提物抑制率分别为 93.33±5.77 和 100±0.0 ,差异显著,蒸馏水和 1.5% DMSO 无抑制作用,左旋咪唑抑制率 100%,体现提取物对 L2 幼虫运动抑制效果及浓度依赖关系。

L2 幼虫运动的半数抑制浓度():横坐标为浓度对数(mg/mL),纵坐标为抑制率。水提物和醇提物分别为 1.08mg/mL 和 1.02mg/mL,表明醇提物对 L2 幼虫运动抑制活性更强。

结果表明:

虫卵孵化试验:5mg/mL 时,水提物和醇提物显著抑制虫卵孵化;醇提物的为 1.4mg/mL ,水提物未确定,表明醇提物对虫卵孵化抑制作用更强。

幼虫运动性测定:5mg/mL 时,水提物和醇提物对 L1、L2 幼虫运动性抑制明显,呈浓度依赖性;L1 幼虫中,醇提物和水提物分别为 1.85mg/mL 和 2.4mg/mL;L2 幼虫中,二者分别为 1.02mg/mL 和 1.08mg/mL,显示醇提物活性更高。植物化学成分筛选显示水提物化学成分种类更多。

4.研究讨论:醇提物对虫卵孵化抑制作用可能与提取物中的皂苷有关,其抑制虫卵孵化结构发育或影响虫卵渗透。提取物对 L1、L2 幼虫有杀幼虫活性,醇提物效果更佳,L1 幼虫更敏感。提取物的抗蠕虫特性可能源于其所含的多种次生代谢物。

5.研究结论:本研究科学验证了披针叶罗庚梅在喀麦隆民间医学中对抗蠕虫的作用,但需进一步开展体内实验和毒性测试,以评估其安全性,确定能否作为抗寄生虫药物。

WMicrotracker小动物活动力分析系统,为测试培养于液体中的小模式动物而优化设计,在24、48、96或384孔板中自动量化小模式动物的行为活动。已成功证明了可应用于例如线虫(C.elegans)、斑马鱼幼虫(Zebrafish larvae)和其它昆虫幼虫(insects larvae),应用于化合物筛选、RNAI/吗-啉试验、转基因试验、长周期测试或自定义实验;毒性测试、麻痹试验、代谢试验、疾病模型、突触调节器、抗逆性、健康期(衰老)、趋化性、卵孵化等实验。
 

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