方案摘要：菌落总数测定是食品微生物检测非常重要的一个项目，该项目的检测是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。自动培养基制备器通过自动化技术实现培养基的精准配制、灭菌和分装，显著提升检验效率与标准化程度。
 
方案详情：
一、实验原理
       利用培养基提供微生物生长的营养环境（如碳源、氮源、无机盐、水等），使食品中存活的微生物在适宜条件下繁殖形成可见菌落。通过平板计数法（如倾注法、涂布法）统计菌落数量，反映食品的微生物污染程度。
二、实验准备
1、仪器和设备
①  恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。
②  冰箱：2 ℃~5 ℃。
③  恒温装置：48 ℃±2 ℃。
④  天平：感量为 0.1 g。
⑤  均质器。
⑥  振荡器。
⑦  PIpetty电动移液器：10ML量程、1ML量程。
⑧  无菌锥形瓶：容量 250 mL、500 mL。
⑨  无灭菌平皿：fluidot  FDT-9CM-2-S，直径90 mm。
⑩  pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。
⑪  蠕动泵分液器：fluidot  600D。
⑫  自动菌落计数仪SHASHIN KAGAKU，PSF-2100。
⑬  全自动培养皿分装仪fluidot，FDT-MF80。
⑭  RAYPA自动培养基制备器
 
2、培养基和试剂
①  平板计数琼脂培养基
②  菌落总数测试片
③  无菌磷酸盐缓冲液
④  无菌生理盐水
 
 
三、检验程序
1、菌落总数的检验程序如下：
 
四、实验步骤
1、使用RAYPA自动培养基制备器，自动制备实验所需的琼脂培养基。
2、样品稀释
固体和半固体样品：称取 25g样品置于盛有 225 mL无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min~10000 r/min 均质1 min~2 min，或放入盛有 225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min~2 min，制成 1∶10 的样品匀液。
液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL样品置于盛有 225 mL无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，或放入盛有 225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min~2 min，制成1：10的样品匀液。
 
3、 用1mL量程的Pipetty电动移液器吸取 1：10 样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，在振荡器上振荡混匀，制成1：100 的样品匀液。
 
4、 按上述操作，制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，需重新换1次吸头。
5、 根据对样品污染状况的估计，选择1个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液)，吸取1 mL样品匀液于无菌培养皿内，每个稀释度做两个培养皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌培养皿内作空白对照。
 
6、 全自动培养皿分装仪自动将 15 mL~20 mL的46 ℃~50 ℃平板计数琼脂培养基倾注至培养皿，并自动混合均匀培养皿。
 
 
7、水平放置待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养 48 h±2 h。水产品 30 ℃±1℃培养72 h±3 h。如果样品中可能含有在琼脂培养基表面蔓延生长的菌落，可在凝固后的琼脂培养基表面覆盖一薄层平板计数琼脂培养基，凝固后翻转平板，进行培养。
8、使用自动菌落计数仪，1-3秒自动计数可疑菌落，并输出报告。