LLC细胞的培养复苏和常见问题解答_abio生物试剂品牌网
【细胞介绍】
Lewis肺癌是从C57BL小鼠的肺建立的细胞系，该小鼠带有由原发性Lewis肺癌的移植产生的肿瘤。LLC细胞对1, 3-双-（2-氯乙基）-1-亚硝基脲有抗性，但对甲氨蝶呤敏感。据报道，LLC细胞具有高度致瘤性，可以在C57BL小鼠成瘤，但在小鼠中转移性较弱。LLC细胞在培养瓶中形成多层，但实际上没有融合。LLC细胞鼠痘病毒阴性，被广泛用作转移模型，并有助于研究癌症化疗药物的机制。
以下是中乔新舟拍摄的LLC细胞拍摄的在不同放大倍数下的图片：
4X
10X
20X
细胞名称：LLC小鼠肺癌细胞
细胞别称：LL/2 (LLC1); LL/2 (LLc1); LL/2(LLc1); LL/2; LL2; LLC1; LLC; Lewis lung carcinoma line 1; Lewis lung carcinoma; Lewis-Lung; Lewis Lung
产品货号：ZQ0203
生长特性：半贴半悬
培养条件 ：DMEM高糖（品牌：中乔新舟 货号：ZQ-100）+10%胎牛血清（中乔新舟 货号：ZQ0500）+1%双抗（中乔新舟 货号：CSP006）
完全培养基货号：ZM0203
【细胞传代】
该细胞为半贴壁半悬浮细胞，悬浮细胞是活细胞，可用离心管收集细胞悬液后，于（125g，3～5 分钟）1000-1200rmp 收集细胞；部分贴壁不牢的细胞可直接吹起使之悬浮；贴壁较牢固的细胞可用 PBS 润洗后，在培养瓶中加入 1-2 毫升 0.25% 胰蛋白酶溶液（含 EDTA）置于 37℃培养箱中消化，待细胞变圆收缩成流沙状态脱落后可用 4-6 mL 左右完全培养基进行终止消化，轻轻吹散细胞后离心搜集细胞；将悬浮的细胞和贴壁的细胞收集到 一起混匀后按比例接种到新的培养瓶。
【细胞冻存】
1.细胞密度 80%以上，活细胞百分率达 95%以上时，将细胞按照以上步骤进行消化收集细胞沉淀进行冻存。
2.细胞沉淀用适量 4°C 冻存液（货号：CSP042）重悬， 建议一瓶 T25 细胞冻存一管（1ml/管），直接将分装 好的细胞冻存管置于-80℃超低温冰箱中过夜，若需液氮长期保存，需先置于-80℃至少一天后方可转至液氮罐中。
NOTE:若不是我司冻存液请按照冻存液说明书操作，若是自配冻存液需梯度降温冻存(2-8℃，放置 40min:-20℃,放置 30min-60min， -80℃放置一天后转移至液氮保存)或使用程序降温盒降温后，再转移至液氮中保存。
【细胞复苏】
1.液氮取出的细胞放入干冰中转移到细胞房，提前准备好完全培养基，离心管。
2.冻管细胞在 37°C 水浴中迅速解冻（大约 1-2 分钟）。为了减少污染的可能性，保持冻管瓶盖在水浴液面之 上。 一旦大部分内容物解冻，立即将冻管移出水浴，70%的乙醇消毒冻管外壁。
3.将内容物转移到含 3-6mL 完全培养基的离心管中，轻轻混匀，离心（125 g，3～5 分钟）1000-1200rmp 去除培养基， 细胞沉淀用手指弹松，添加 3ml 完全培养基混匀细胞并进行计数，用适量完全培养基将细胞密度调整至 0.6-2.0X105，转移至培养瓶中，于培养箱中静置培养。建议 T25 培养瓶添加 5-7ml 完全培养基。当密度达 到 80%以上时传代。
【常见问题】
1.培养过程中细胞碎片较多怎么处理？
1）细胞内的黑色颗粒是细胞外分泌泡及细胞器折光，这个属于细胞自身特性，无法清除也无法改变，大部分细胞都会有这种现象，只是不同细胞颗粒多少有区别，细胞培养体系不适应、营养缺乏、渗透压异常等均可能导致细胞内颗粒增加，建议使用合适的培养条件。
2）细胞外的黑色颗粒大部分是细胞碎片和细胞代谢产物，可通过换液去除，因此每2天正常换液即可，换液前培养基充分预热。
2.细胞具体消化时间是多久？
每个客户用的胰酶活力及消化步骤、试剂都是不一样的，不能完全规定消化时间，以实际消化效果和客户经验为准。
【发表过的文献】
下面列举了几篇代表性的文献，可以参考：
1.论文题目：B4GALT1 promotes immune escape by regulating the expression of PD-L1 at multiple levels in lung adenocarcinoma.
期刊： JOURNAL OF EXPERIMENTAL & CLINICAL CANCER RESEARCH 影响因子：11.3
2. 论文题目：Ansofaxine suppressed NSCLC progression by increasing sensitization to combination immunotherapy.
期刊：INTERNATIONAL IMMUNOPHARMACOLOGY 影响因子：4.8
3. 论文题目：The combination of a PTP1B inhibitor, TNFR2 blocker, and PD 1 antibody suppresses the progression of non small cell lung cancer tumors by enhancing immunocompetence.
期刊：ONCOLOGY REPORTS 影响因子：3.8
Lewis肺癌是从C57BL小鼠的肺建立的细胞系，该小鼠带有由原发性Lewis肺癌的移植产生的肿瘤。LLC细胞对1, 3-双-（2-氯乙基）-1-亚硝基脲有抗性，但对甲氨蝶呤敏感。据报道，LLC细胞具有高度致瘤性，可以在C57BL小鼠成瘤，但在小鼠中转移性较弱。LLC细胞在培养瓶中形成多层，但实际上没有融合。LLC细胞鼠痘病毒阴性，被广泛用作转移模型，并有助于研究癌症化疗药物的机制。
以下是中乔新舟拍摄的LLC细胞拍摄的在不同放大倍数下的图片：
4X
10X
20X
细胞名称：LLC小鼠肺癌细胞
细胞别称：LL/2 (LLC1); LL/2 (LLc1); LL/2(LLc1); LL/2; LL2; LLC1; LLC; Lewis lung carcinoma line 1; Lewis lung carcinoma; Lewis-Lung; Lewis Lung
产品货号：ZQ0203
生长特性：半贴半悬
培养条件 ：DMEM高糖（品牌：中乔新舟 货号：ZQ-100）+10%胎牛血清（中乔新舟 货号：ZQ0500）+1%双抗（中乔新舟 货号：CSP006）
完全培养基货号：ZM0203
【细胞传代】
该细胞为半贴壁半悬浮细胞，悬浮细胞是活细胞，可用离心管收集细胞悬液后，于（125g，3～5 分钟）1000-1200rmp 收集细胞；部分贴壁不牢的细胞可直接吹起使之悬浮；贴壁较牢固的细胞可用 PBS 润洗后，在培养瓶中加入 1-2 毫升 0.25% 胰蛋白酶溶液（含 EDTA）置于 37℃培养箱中消化，待细胞变圆收缩成流沙状态脱落后可用 4-6 mL 左右完全培养基进行终止消化，轻轻吹散细胞后离心搜集细胞；将悬浮的细胞和贴壁的细胞收集到 一起混匀后按比例接种到新的培养瓶。
【细胞冻存】
1.细胞密度 80%以上，活细胞百分率达 95%以上时，将细胞按照以上步骤进行消化收集细胞沉淀进行冻存。
2.细胞沉淀用适量 4°C 冻存液（货号：CSP042）重悬， 建议一瓶 T25 细胞冻存一管（1ml/管），直接将分装 好的细胞冻存管置于-80℃超低温冰箱中过夜，若需液氮长期保存，需先置于-80℃至少一天后方可转至液氮罐中。
NOTE:若不是我司冻存液请按照冻存液说明书操作，若是自配冻存液需梯度降温冻存(2-8℃，放置 40min:-20℃,放置 30min-60min， -80℃放置一天后转移至液氮保存)或使用程序降温盒降温后，再转移至液氮中保存。
【细胞复苏】
1.液氮取出的细胞放入干冰中转移到细胞房，提前准备好完全培养基，离心管。
2.冻管细胞在 37°C 水浴中迅速解冻（大约 1-2 分钟）。为了减少污染的可能性，保持冻管瓶盖在水浴液面之 上。 一旦大部分内容物解冻，立即将冻管移出水浴，70%的乙醇消毒冻管外壁。
3.将内容物转移到含 3-6mL 完全培养基的离心管中，轻轻混匀，离心（125 g，3～5 分钟）1000-1200rmp 去除培养基， 细胞沉淀用手指弹松，添加 3ml 完全培养基混匀细胞并进行计数，用适量完全培养基将细胞密度调整至 0.6-2.0X105，转移至培养瓶中，于培养箱中静置培养。建议 T25 培养瓶添加 5-7ml 完全培养基。当密度达 到 80%以上时传代。
【常见问题】
1.培养过程中细胞碎片较多怎么处理？
1）细胞内的黑色颗粒是细胞外分泌泡及细胞器折光，这个属于细胞自身特性，无法清除也无法改变，大部分细胞都会有这种现象，只是不同细胞颗粒多少有区别，细胞培养体系不适应、营养缺乏、渗透压异常等均可能导致细胞内颗粒增加，建议使用合适的培养条件。
2）细胞外的黑色颗粒大部分是细胞碎片和细胞代谢产物，可通过换液去除，因此每2天正常换液即可，换液前培养基充分预热。
2.细胞具体消化时间是多久？
每个客户用的胰酶活力及消化步骤、试剂都是不一样的，不能完全规定消化时间，以实际消化效果和客户经验为准。
【发表过的文献】
下面列举了几篇代表性的文献，可以参考：
1.论文题目：B4GALT1 promotes immune escape by regulating the expression of PD-L1 at multiple levels in lung adenocarcinoma.
期刊： JOURNAL OF EXPERIMENTAL & CLINICAL CANCER RESEARCH 影响因子：11.3
2. 论文题目：Ansofaxine suppressed NSCLC progression by increasing sensitization to combination immunotherapy.
期刊：INTERNATIONAL IMMUNOPHARMACOLOGY 影响因子：4.8
3. 论文题目：The combination of a PTP1B inhibitor, TNFR2 blocker, and PD 1 antibody suppresses the progression of non small cell lung cancer tumors by enhancing immunocompetence.
期刊：ONCOLOGY REPORTS 影响因子：3.8
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