• 阿尔茨海默病（AD）病理基础：主要与淀粉样变性和炎症相关，Aβ40 和 Aβ42 是关键的淀粉样 β 肽异构体，其中 Aβ42 更易聚集且致病性更强2。
• 研究意义：外周血单核细胞（PBMC）常被用于评估 AD 相关分子（如 Aβ42）引发的细胞因子变化，但传统悬浮培养未考虑细胞粘附因素，可能与体内环境存在差异，影响研究结果12。
• 研究目的：探究 hPBMCs 的细胞 - 基质粘附对其体外促炎状态的影响，比较悬浮细胞与固定化细胞对 Aβ42 刺激的响应，并分析 β1 整合素的作用13。

• 细胞来源与处理
  • 来源：健康成年捐赠者的 hPBMCs，经 Ficoll–Hypaque 方法分离，保存在 CryoStor® CS10 培养基中，细胞活力 92.0%，浓度 1.5×10⁶/ml456。
  • 培养方式：

• 悬浮培养：RPMI-1640 培养基（含 10.0% 胎牛血清等），24 孔板培养 24 小时（37.0±0.1°C、5.0±0.1% CO₂）78。
• 固定化培养：CERO 生物反应器用于固定化细胞的培养，控制培养环境参数。采用 GEM 技术，将细胞固定在含 1.0% I 型胶原蛋白、0.5% RGD 肽和 1.0% 纤连蛋白的藻酸盐微载体表面，在生物反应器中培养 24 小时91011。

• 实验处理
  • rAβ42 刺激：浓度 15nM，超声处理分散聚集体后加入细胞培养体系1213。
  • β1 整合素阻断：hPBMCs 与抗 β1 整合素抗体（1:200）在 37°C 孵育 30 分钟后进行固定化培养1415。
• 检测方法
  • 细胞因子（TNFα、IL-1β）和 Aβ40 含量：采用 ELISA 试剂盒，在 FL600 微孔板多模式阅读器上检测，结果以 ng/g 总蛋白表示161718。
  • 活细胞成像：使用激光扫描共聚焦显微镜（FV10i-LIV），通过荧光探针 CRANAD-2 和 MCAAD-3 分别观察 rAβ42 和 Aβ40 的定位与积累，计算比值指数 R（rAβ42/Aβ40）192021。
  • 统计分析：单因素方差分析（ANOVA）结合 Tukey 多重比较检验，p<0.05 为差异显著22。

• 细胞因子和 Aβ40 的变化
  • 无 rAβ42 时：TNFα 和 Aβ40 含量在 24 小时内无显著变化，IL-1β 含量在 24 小时后显著降低（悬浮细胞：285.2±15.6 ng/g；固定化细胞：304.1±15.5 ng/g）232627。
  • 有 rAβ42 时：

• TNFα 含量增加，24 小时时悬浮细胞达 108.3±11.5 ng/g，固定化细胞达 161.6±9.2 ng/g2627。
• Aβ40 含量增加，24 小时时悬浮细胞达 67.5±5.1 ng/g，固定化细胞达 89.2±4.2 ng/g2627。
• IL-1β 未观察到积累23。

• 肽的定位与比值变化
  • Aβ40 在细胞质中积累，rAβ42 在细胞膜外表面聚集24。
  • 比值指数 R（rAβ42/Aβ40）：悬浮细胞从 0.08 升至 0.76，固定化细胞从 0.06 升至 0.42，固定化细胞比值更低25。
• β1 整合素阻断的影响：阻断后，固定化细胞中 TNFα 和 Aβ40 的积累显著受抑制（TNFα：72.8±5.5 ng/g；Aβ40：77.9±5.5 ng/g），但仍高于悬浮细胞2829。

• 固定化细胞对异源 Aβ42 刺激的基本指标水平及响应强度显著高于悬浮细胞30。
• 细胞 - 基质粘附（由 β1 整合素介导）可增强 hPBMCs 的信号转导和合成活性30。
• 传统悬浮培养未考虑细胞粘附因素，可能导致研究健康或 AD 患者来源的 hPBMCs 对外源性刺激的反应时得出错误结论30。

OLS CERO 认证的中国授权经销商：

上海迹亚国际商贸有限公司
GAIa China Co.,ltd.