方案摘要：本方案围绕 PIpetty 电动移液器在动物布鲁氏菌病微量法中的应用展开。通过其高精度移液功能，精准控制关键试剂添加量，显著降低假阴性与假阳性率；连续分液模式可实现 96 孔板快速操作，使加样效率提升 70%；Pipetty 电动移液器的应用，有效解决传统手动移液的误差大、效率低等问题，为基层兽医站、海关口岸等机构开展动物布鲁氏菌病微量法检测，提供高效、准确、可靠的技术支持。
 
方案详情：
一、实验原理
      布鲁氏菌病微量法检测基于抗原 - 抗体反应原理。布鲁氏菌试管凝集试验抗原与待检动物血清中的布鲁氏菌抗体相遇，若血清中存在相应抗体，便会发生特异性结合，形成肉眼可见的凝集物。通过观察凝集反应的程度和结果，结合阳性、阴性对照，判断待检动物血清中是否含有布鲁氏菌抗体，从而确定动物是否感染布鲁氏菌病 。
二、‌ 实验准备
1、设配和材料
① 恒温培养箱。
② 振荡器。
③ Pipetty电动移液器1-250、5-1000量程及配套吸头、96 孔U形反应板。
④ 薄膜、湿盒（带盖子长方形容器，底部铺一层湿纱布或湿水纸）。
 
2、试剂和材料
① 布鲁氏菌试管凝集试验抗原。
② 布鲁氏菌阳性对照血清和阴性对照血清。
③ 含 0.5% 苯酚的生理盐水。
④ 含 0.5% 苯酚的 10% 氯化钠溶液。

三、实验步骤
1、将牛（马、鹿、骆驼）血清稀释，每份血清用4个连续的U形孔；使用Pipetty电动移液器在反应板的第1孔加 192μL稀释液（含 0.5%苯酚的生理盐水）；设置连续分液模式，在第 2孔~第 4孔等量加入100μL稀释液；取待检血清8μL，加入第1孔，使用自动混匀模式，一键混匀；从第1孔吸取 100μL，混合液加入第2孔自动混匀，如此倍比稀释至第4孔，从第4孔弃去混合液 100μL。
注：稀释完毕，血清从第1孔至第4孔的血清稀释度分别为1：25、1：50、1：100和1：200。
 
2、对羊（猪、犬）血清进行稀释，每份血清用 4个连续的U形孔，在反应板的第1孔加184μL，稀释液（含 0.5%苯酚的 10% 氯化钠溶液），第 2孔~第 4孔等量加入100μL稀释液；取待检血清 16μL，加入第1孔，自动混匀；从第1孔吸取 100μL混合液加入第2孔自动混匀，如此倍比稀释至第4孔，从第 4孔弃去混合液100μL。
注：稀释完毕，血清从第1孔至第4孔的血清稀释度分别为1：12.5、1：25、1：50和1：100。
3、用含 0.5%苯酚的生理盐水稀释液稀释成工作抗原。
4、分别取 100μL 稀释好的工作抗原，使用 Pipetty 电动移液器加入上述各孔稀释好的血清中，并振荡混匀。 注：牛血清稀释度则依次变为1：50、1：100、1：200和 1：400；羊血清稀释度则依次变为1：25、1：50、1：100和1：200。
5、完成上述加样后，用薄膜将反应板严密封盖后，放入湿盒，并置恒温培养箱，37 ℃孵育 18h~24h。
6、取出反应板，观察并记录结果。7、每次试验时均应设阳性血清对照、阴性血清对照和抗原对照。阴性血清对照和阳性血清对照的稀释与待检血清相同；抗原对照按说明书稀释到规定容量，取 500μL，再加500μL稀释液，观察抗原是否有自凝现象。
8、凝集反应程度分为5个等级：
    a）++++：菌体完全凝集，1孔~4 孔凝集物呈伞状均匀铺于孔；
    b）+++：菌体几乎完全凝集，1孔~3孔凝集物呈伞状均匀铺于孔底，第4孔孔底呈现白色点状；
    c）++：菌体凝集显著，1孔~2 孔凝集物呈伞状均匀铺于孔底，3孔~4孔孔底呈现白色点状；
    d）+：凝集物有沉淀，第1孔凝集物呈伞状均匀铺于孔底，2孔~4 孔孔底呈现白色点状；
    e）-：无凝集，1孔~4孔孔底均呈现白色点状。
9、 同时满足下列条件，判定试验条件成立：
   a）阳性对照血清出现完全凝集“++++”；
   b）阴性对照血清无凝集“-”；
   c）抗原对照无自凝“-”。
 
四、结果判定
符合试验成立的条件下，结果判定如下：
a）待检血清出现“++”及以上凝集现象时，判定为阳性；
b）待检血清出现“+”凝集现象时，判定为可疑；
c）待检血清出现“-”时，判定为阴性。
注：对试验结果为“可疑”的动物，应于3周~4周后重新采血检验，若为可疑，判为阳性。