Pipetty电动移液器在动物布鲁氏菌病检测（试管凝集实验）中的应用_abio生物试剂品牌网
方案摘要：本方案主要阐述了 PIpetty 电动移液器在动物布鲁氏菌病试管凝集实验（SAT）中的应用。其凭借精准的血清梯度稀释、抗原悬液添加功能，有效减少人为误差，保障反应体系比例恒定；自动吸排与混匀功能，确保抗原-抗体充分结合。同时，Pipetty电动移液器的连续分液模式提升检测效率，精度稳定，无需频繁校准，可有效保障体积精度，为动物布鲁氏菌病的高效、可靠检测提供有力支持。
方案详情：
一、实验原理
布鲁氏菌试管凝集实验（SAT）基于抗原 - 抗体特异性结合原理。用灭活布鲁氏菌菌体抗原与倍比稀释的待检血清混合，37℃孵育后，若血清含特异性抗体（IgM、IgG 等），会与抗原表面脂多糖等抗原决定簇结合，通过桥联作用使抗原颗粒凝集，形成肉眼可见的絮状或颗粒状凝集物，液体变澄清，以此判断血清中是否存在布鲁氏菌抗体，辅助诊断感染。
二、 实验准备
1、设配和材料
① 恒温培养箱。
② 振荡器。
③ 比浊仪。
④ Pipetty电动移液器1-250、5-1000量程和配套无菌吸头、玻璃试管及试管架。
2、试剂和材料
① 布鲁氏菌试管凝集试验抗原。
② 布鲁氏菌阳性对照血清和阴性对照血清。
③ 含 0.5% 苯酚的生理盐水。
④ 含 0.5% 苯酚的 10% 氯化钠溶液。
⑤ 参照比浊管。
三、实验步骤
1、对 牛（马、鹿、骆驼）血清进行稀释，每份血清用 4支试管，使用Pipetty电动移液器在第1管加 960 μL稀释液（含 0.5%苯酚的生理盐水），第2管~第4管各加入 500 μL稀释液，然后取待检血清 40 μL，加入第1管内，并混合均匀；取 500μL混合液加入第2管并充分混匀，如此倍比稀释至第4管；从第4管取混匀液 500 μL 弃去。
注：稀释完毕，血清从第1管至第4管的血清稀释度分别为1：25、1：50、1：100和1：200。
2、对 羊（猪、犬）血清进行稀释，每份血清用 4支试管；第1管加 920 μL稀释液（含 0.5% 苯酚的 10% 氯化钠溶液）；第2管~第4 管各加入 500 μL稀释液；然后取待检血清 80μL，加入第1管内，并混合均匀；取 500μL混合液加入第2管并充分混匀，如此倍比稀释至第4管；从第4管取混匀液 500 μL 弃去。
注：稀释完毕，血清从第1管至第4管的血清稀释度分别为1：12.5、1：25、1：50和1：100。
3、用含 0.5% 苯酚的生理盐水稀释抗原到工作抗原。
4、分别取 500 μL稀释好的工作抗原，加入上述各孔已稀释好的血清中，设置自动混匀功能，一键混匀。注：牛（马、鹿，骆驼）的血清稀释度则依次变为1：50、1：100、1：200和1：400：羊（猪，犬）的血清稀释度则依次变为1：25、1：50、1：100和1：200。
5、完成上述加样后，将试管放置恒温恒湿培养箱，37 ℃孵育 18 h~24 h。
6、取出试管，与制备的比浊管进行比较，观察并记录结果。
7、每次试验时均应设阳性血清对照、阴性血清对照和抗原对照。阴性血清对照和阳性血清对照的稀释与待检血清来源的动物种相同；抗原对照稀释到规定容量，取 500 μL，再加 500μL 稀释液，观察抗原是否有自凝现象。
8、凝集反应程度分为5个等级（参照比浊管，按各试管上层液体清亮度判读）：
a） ++++：菌体完全凝集和沉淀，液体 100% 清亮；
b） +++：菌体几乎完全凝集和沉淀，液体 75% 清亮；
c） ++：菌体有显著凝集和沉淀，液体 50%清亮；
d） +：有清楚可见的凝集和沉淀，液体 25% 清亮；
e） -：无凝集和沉淀，液体均匀浑浊。
9、同时满足下列条件，判定试验条件成立：
a）阳性对照血清出现完全凝集“++++”
b）阴性对照血清无凝集“-”
c）抗原对照无自凝“-”
四、结果判定
1、实验条件成立的情况下，对试验结果作出阳性、可疑、阴性的判定。
a）阳性结果：-牛、马、鹿、骆驼血清 1：100稀释，出现“++”及以上凝集；--猪、山羊、绵羊、犬血清 1：50 稀释，出现“++”及以上凝集。
b）可疑结果：--牛、马、鹿、骆驼血清 1：50 稀释，出现“++”以上凝集；--猪、山羊、绵羊、犬血清 1：25 稀释，出现“++”以上凝集。对试验结果为“可疑”的动物，应于3周~4 周后重新采血检验，若为可疑，判为阳性。
c）阴性结果：待检血清出现“-”，即不出现任何凝集，判定为阴性。
方案详情：
一、实验原理
布鲁氏菌试管凝集实验（SAT）基于抗原 - 抗体特异性结合原理。用灭活布鲁氏菌菌体抗原与倍比稀释的待检血清混合，37℃孵育后，若血清含特异性抗体（IgM、IgG 等），会与抗原表面脂多糖等抗原决定簇结合，通过桥联作用使抗原颗粒凝集，形成肉眼可见的絮状或颗粒状凝集物，液体变澄清，以此判断血清中是否存在布鲁氏菌抗体，辅助诊断感染。
二、 实验准备
1、设配和材料
① 恒温培养箱。
② 振荡器。
③ 比浊仪。
④ Pipetty电动移液器1-250、5-1000量程和配套无菌吸头、玻璃试管及试管架。
2、试剂和材料
① 布鲁氏菌试管凝集试验抗原。
② 布鲁氏菌阳性对照血清和阴性对照血清。
③ 含 0.5% 苯酚的生理盐水。
④ 含 0.5% 苯酚的 10% 氯化钠溶液。
⑤ 参照比浊管。
三、实验步骤
1、对 牛（马、鹿、骆驼）血清进行稀释，每份血清用 4支试管，使用Pipetty电动移液器在第1管加 960 μL稀释液（含 0.5%苯酚的生理盐水），第2管~第4管各加入 500 μL稀释液，然后取待检血清 40 μL，加入第1管内，并混合均匀；取 500μL混合液加入第2管并充分混匀，如此倍比稀释至第4管；从第4管取混匀液 500 μL 弃去。
注：稀释完毕，血清从第1管至第4管的血清稀释度分别为1：25、1：50、1：100和1：200。
2、对 羊（猪、犬）血清进行稀释，每份血清用 4支试管；第1管加 920 μL稀释液（含 0.5% 苯酚的 10% 氯化钠溶液）；第2管~第4 管各加入 500 μL稀释液；然后取待检血清 80μL，加入第1管内，并混合均匀；取 500μL混合液加入第2管并充分混匀，如此倍比稀释至第4管；从第4管取混匀液 500 μL 弃去。
注：稀释完毕，血清从第1管至第4管的血清稀释度分别为1：12.5、1：25、1：50和1：100。
3、用含 0.5% 苯酚的生理盐水稀释抗原到工作抗原。
4、分别取 500 μL稀释好的工作抗原，加入上述各孔已稀释好的血清中，设置自动混匀功能，一键混匀。注：牛（马、鹿，骆驼）的血清稀释度则依次变为1：50、1：100、1：200和1：400：羊（猪，犬）的血清稀释度则依次变为1：25、1：50、1：100和1：200。
5、完成上述加样后，将试管放置恒温恒湿培养箱，37 ℃孵育 18 h~24 h。
6、取出试管，与制备的比浊管进行比较，观察并记录结果。
7、每次试验时均应设阳性血清对照、阴性血清对照和抗原对照。阴性血清对照和阳性血清对照的稀释与待检血清来源的动物种相同；抗原对照稀释到规定容量，取 500 μL，再加 500μL 稀释液，观察抗原是否有自凝现象。
8、凝集反应程度分为5个等级（参照比浊管，按各试管上层液体清亮度判读）：
a） ++++：菌体完全凝集和沉淀，液体 100% 清亮；
b） +++：菌体几乎完全凝集和沉淀，液体 75% 清亮；
c） ++：菌体有显著凝集和沉淀，液体 50%清亮；
d） +：有清楚可见的凝集和沉淀，液体 25% 清亮；
e） -：无凝集和沉淀，液体均匀浑浊。
9、同时满足下列条件，判定试验条件成立：
a）阳性对照血清出现完全凝集“++++”
b）阴性对照血清无凝集“-”
c）抗原对照无自凝“-”
四、结果判定
1、实验条件成立的情况下，对试验结果作出阳性、可疑、阴性的判定。
a）阳性结果：-牛、马、鹿、骆驼血清 1：100稀释，出现“++”及以上凝集；--猪、山羊、绵羊、犬血清 1：50 稀释，出现“++”及以上凝集。
b）可疑结果：--牛、马、鹿、骆驼血清 1：50 稀释，出现“++”以上凝集；--猪、山羊、绵羊、犬血清 1：25 稀释，出现“++”以上凝集。对试验结果为“可疑”的动物，应于3周~4 周后重新采血检验，若为可疑，判为阳性。
c）阴性结果：待检血清出现“-”，即不出现任何凝集，判定为阴性。
