H9C2细胞培养中的实操技巧和常见问题解答_abio生物试剂品牌网
【产品介绍】
H9c2(2-1)是来源于胚胎BD1X大鼠心脏组织的原始克隆细胞系的亚克隆，具有骨骼肌的许多特性。该细胞系可用于心血管疾病的研究。该细胞表现出许多骨骼肌的特性，且该细胞株中的成肌细胞能融合形成多核的肌管，并对乙酰胆碱的刺激发生反应。如果培养基中的血清浓度下降到1%，融合发生得很快。目前H9c2(2-1)细胞已被广泛用于研究心脏生物学和疾病的各个方面。
H9c2(2-1)是原始克隆细胞系的亚克隆，该细胞系由Kimes .和Brandt .从胚胎BD1X大鼠心脏组织获得，并显示出骨骼肌的许多特性。 这个细胞株中的成肌细胞能融合形成多核的肌管，并对乙酰胆碱的刺激发生反应。 如果培养基中的血清浓度下降到1%，融合发生得很快。
H9c2(2-1)细胞培养时存在少量圆形贴壁细胞，为正常的细胞增殖现象。细胞处于不同增殖周期，具体形态会有差异，例如分裂期细胞通常会变小变立体呈圆形甚至脱落，而分裂间期细胞会铺展比较开，这些都是正常增殖现象。以下是中乔新舟拍摄的不同放大倍数的H9C2的细胞图：
4X
10X
20X
细胞名称：H9C2大鼠心肌细胞
细胞别名：H9c2 (2-1); H9c2; H9C2
产品货号：ZQ0102
生长特性：贴壁生长
培养条件：DMEM高糖（品牌：中乔新舟 货号：ZQ-100）+10%FBS（品牌：中乔新舟 货号：ZQ500-A）+1%双抗（中乔新舟 货号：CSP006）
完全培养基货号：ZM0102
培养环境：95%空气，5%二氧化碳；37℃
【传代培养】
该细胞为贴壁生长：
1、细胞有脱落情况时，将培养液转移到无菌离心管中，离心（125g，3～5分钟）1000-1200rmp收集悬浮细胞（漂浮细胞少，可能无沉淀，大部分在管壁上）；轻柔去除培养基，等贴壁细胞消化收集在一起混匀接种。
2、贴壁细胞用PBS洗1~2次，每次3-5ml，添加1ml 胰酶（0.25% 含EDTA）到细胞瓶中，轻轻摇匀，使胰酶溶液铺满细胞表面，放入培养箱中。1-3min后取出到显微镜下观察，(若细胞无变化继续放入培养箱消化)一旦细胞变圆、轻拍瓶尾部大部分细胞开始脱落，当达到70-80%细胞漂浮脱落，立即加入5ml完全培养基(含10%FBS)中和。用移液管轻轻吹打6-8次，使细胞充分解离。
3、将细胞悬液转移到无菌离心管中，计数，离心收集细胞。用适量完全培养基重悬细胞沉淀，使细胞密度为每毫升0.6-2X105。将细胞悬液转至培养瓶中，静置于培养箱中。建议T25培养瓶添加5-7ml完全培养基，以后2-3天进行换液。
【细胞冻存】
1、细胞密度80%以上，活细胞百分率达95%以上时，将细胞按照以上步骤进行消化收集细胞沉淀进行冻存。
2、细胞沉淀用适量4°C冻存液（货号：CSP042）重悬， 建议一瓶T25细胞冻存一管（1ml/管），直接将分装好的细胞冻存管置于-80℃超低温冰箱中过夜，若需液氮长期保存，需先置于-80℃至少一天后方可转至液氮罐中。
NOTE:若不是我司冻存液请按照冻存液说明书操作，若是自配冻存液需梯度降温冻存(2-8℃，放置 40min:-20℃,放置 30min-60min，-80℃放置一天后转移至液氮保存)或使用程序降温盒降温后，再转移至液氮中保存。
【细胞复苏】
1、液氮取出的细胞放入干冰中转移至细胞房，提前准备好完全培养基，离心管等试剂和耗材。
2、冻管细胞在37°C水浴中迅速解冻（大约1-2分钟）。为了减少污染的可能性，保持冻管瓶盖在水浴液面之上。 一旦大部分内容物解冻，立即将冻管移出水浴，70%的乙醇消毒冻管外壁。
3、将内容物转移到含3-6mL完全培养基的离心管中，轻轻混匀，离心（125 g，3～5分钟）1000-1200rmp去除培养基， 管底细胞沉淀用手指弹松，再添加3ml完全培养基至离心管内混匀细胞并进行计数。
4、用适量完全培养基将细胞密度调整至0.6-2.0X105，转移至培养瓶中，再将瓶转移至培养箱中静置培养。T25培养瓶建议添加5-7ml完全培养基。当密度达到80%以上时传代。
【常见问题】
1、H9C2细胞可以传几代?
H9C2细胞系理论上是可以无限传代的，但是研究发现细胞系也会有老化的；收到细胞后自己具体可以传多少代，会受到客户自己养细胞的操作水平技术，操作环境，用的试剂耗材的质量等因素影响。
2、为什么H9C2细胞培养长得慢？
这些因素都会影响细胞长得慢：1）可能是细胞接种得太少，细胞密度太低。可以先培养，然后消化重新铺瓶，提高密度培养；2）操作时力度没控制好，将细胞吹碎，状态变差；3）血清质量不好，影响细胞生长
3、为什么H9C2细胞培养会出现空泡？
1）可能是铺板时铺得不够均匀，局部过于密集，密集地方的细胞就开始状态变差、空泡增多；2）也可能是血清差，需要更换优质血清，及时换液。
4、为什么会出现细胞表面颗粒较多的现象？
可能是培养环境有问题，可以改用中乔新舟的完全培养基（货号：ZM0102）培养，传三代后会恢复平整细胞表面。
5、为什么细胞状态变差，容易漂？
1）可能是血清问题，建议换血清，并注意血清要程序解冻，不能水浴化开
2）也有可能是细胞生长密集，需要及时传代，并不是细胞长满才传代，当有个别地方长得过于密集，容易叠加的时候应该就要传代了。
【注意事项】
1) H9c2(2-1)细胞胞体上有黑色颗粒属于正常现象。该细胞对胎牛血清比较敏感，建议使用高质量胎牛血清或购买我司配套完全培养液。
2) 该细胞需要再密度达到60-70%左右进行传代，过高密度传代会导致细胞融合形成肌管，导致细胞不增长。如果血清质量不好或血清浓度降低，融合会更快产生。
3) 经过长期的培养，细胞的增殖速度会减慢。这是由于该细胞对培养基的酸碱、血清等及其敏感，一旦细胞融合后就会增殖缓慢，需要定期从新克隆筛选成肌细胞。
细胞接种密度推荐1X10的4次方每平方厘米。
4) 消化时间的把控也是必不可少的一个步骤,防止未充分消化分散的细胞融合导致成肌管细胞的形成。
H9c2(2-1)是来源于胚胎BD1X大鼠心脏组织的原始克隆细胞系的亚克隆，具有骨骼肌的许多特性。该细胞系可用于心血管疾病的研究。该细胞表现出许多骨骼肌的特性，且该细胞株中的成肌细胞能融合形成多核的肌管，并对乙酰胆碱的刺激发生反应。如果培养基中的血清浓度下降到1%，融合发生得很快。目前H9c2(2-1)细胞已被广泛用于研究心脏生物学和疾病的各个方面。
H9c2(2-1)是原始克隆细胞系的亚克隆，该细胞系由Kimes .和Brandt .从胚胎BD1X大鼠心脏组织获得，并显示出骨骼肌的许多特性。 这个细胞株中的成肌细胞能融合形成多核的肌管，并对乙酰胆碱的刺激发生反应。 如果培养基中的血清浓度下降到1%，融合发生得很快。
H9c2(2-1)细胞培养时存在少量圆形贴壁细胞，为正常的细胞增殖现象。细胞处于不同增殖周期，具体形态会有差异，例如分裂期细胞通常会变小变立体呈圆形甚至脱落，而分裂间期细胞会铺展比较开，这些都是正常增殖现象。以下是中乔新舟拍摄的不同放大倍数的H9C2的细胞图：
4X
10X
20X
细胞名称：H9C2大鼠心肌细胞
细胞别名：H9c2 (2-1); H9c2; H9C2
产品货号：ZQ0102
生长特性：贴壁生长
培养条件：DMEM高糖（品牌：中乔新舟 货号：ZQ-100）+10%FBS（品牌：中乔新舟 货号：ZQ500-A）+1%双抗（中乔新舟 货号：CSP006）
完全培养基货号：ZM0102
培养环境：95%空气，5%二氧化碳；37℃
【传代培养】
该细胞为贴壁生长：
1、细胞有脱落情况时，将培养液转移到无菌离心管中，离心（125g，3～5分钟）1000-1200rmp收集悬浮细胞（漂浮细胞少，可能无沉淀，大部分在管壁上）；轻柔去除培养基，等贴壁细胞消化收集在一起混匀接种。
2、贴壁细胞用PBS洗1~2次，每次3-5ml，添加1ml 胰酶（0.25% 含EDTA）到细胞瓶中，轻轻摇匀，使胰酶溶液铺满细胞表面，放入培养箱中。1-3min后取出到显微镜下观察，(若细胞无变化继续放入培养箱消化)一旦细胞变圆、轻拍瓶尾部大部分细胞开始脱落，当达到70-80%细胞漂浮脱落，立即加入5ml完全培养基(含10%FBS)中和。用移液管轻轻吹打6-8次，使细胞充分解离。
3、将细胞悬液转移到无菌离心管中，计数，离心收集细胞。用适量完全培养基重悬细胞沉淀，使细胞密度为每毫升0.6-2X105。将细胞悬液转至培养瓶中，静置于培养箱中。建议T25培养瓶添加5-7ml完全培养基，以后2-3天进行换液。
【细胞冻存】
1、细胞密度80%以上，活细胞百分率达95%以上时，将细胞按照以上步骤进行消化收集细胞沉淀进行冻存。
2、细胞沉淀用适量4°C冻存液（货号：CSP042）重悬， 建议一瓶T25细胞冻存一管（1ml/管），直接将分装好的细胞冻存管置于-80℃超低温冰箱中过夜，若需液氮长期保存，需先置于-80℃至少一天后方可转至液氮罐中。
NOTE:若不是我司冻存液请按照冻存液说明书操作，若是自配冻存液需梯度降温冻存(2-8℃，放置 40min:-20℃,放置 30min-60min，-80℃放置一天后转移至液氮保存)或使用程序降温盒降温后，再转移至液氮中保存。
【细胞复苏】
1、液氮取出的细胞放入干冰中转移至细胞房，提前准备好完全培养基，离心管等试剂和耗材。
2、冻管细胞在37°C水浴中迅速解冻（大约1-2分钟）。为了减少污染的可能性，保持冻管瓶盖在水浴液面之上。 一旦大部分内容物解冻，立即将冻管移出水浴，70%的乙醇消毒冻管外壁。
3、将内容物转移到含3-6mL完全培养基的离心管中，轻轻混匀，离心（125 g，3～5分钟）1000-1200rmp去除培养基， 管底细胞沉淀用手指弹松，再添加3ml完全培养基至离心管内混匀细胞并进行计数。
4、用适量完全培养基将细胞密度调整至0.6-2.0X105，转移至培养瓶中，再将瓶转移至培养箱中静置培养。T25培养瓶建议添加5-7ml完全培养基。当密度达到80%以上时传代。
【常见问题】
1、H9C2细胞可以传几代?
H9C2细胞系理论上是可以无限传代的，但是研究发现细胞系也会有老化的；收到细胞后自己具体可以传多少代，会受到客户自己养细胞的操作水平技术，操作环境，用的试剂耗材的质量等因素影响。
2、为什么H9C2细胞培养长得慢？
这些因素都会影响细胞长得慢：1）可能是细胞接种得太少，细胞密度太低。可以先培养，然后消化重新铺瓶，提高密度培养；2）操作时力度没控制好，将细胞吹碎，状态变差；3）血清质量不好，影响细胞生长
3、为什么H9C2细胞培养会出现空泡？
1）可能是铺板时铺得不够均匀，局部过于密集，密集地方的细胞就开始状态变差、空泡增多；2）也可能是血清差，需要更换优质血清，及时换液。
4、为什么会出现细胞表面颗粒较多的现象？
可能是培养环境有问题，可以改用中乔新舟的完全培养基（货号：ZM0102）培养，传三代后会恢复平整细胞表面。
5、为什么细胞状态变差，容易漂？
1）可能是血清问题，建议换血清，并注意血清要程序解冻，不能水浴化开
2）也有可能是细胞生长密集，需要及时传代，并不是细胞长满才传代，当有个别地方长得过于密集，容易叠加的时候应该就要传代了。
【注意事项】
1) H9c2(2-1)细胞胞体上有黑色颗粒属于正常现象。该细胞对胎牛血清比较敏感，建议使用高质量胎牛血清或购买我司配套完全培养液。
2) 该细胞需要再密度达到60-70%左右进行传代，过高密度传代会导致细胞融合形成肌管，导致细胞不增长。如果血清质量不好或血清浓度降低，融合会更快产生。
3) 经过长期的培养，细胞的增殖速度会减慢。这是由于该细胞对培养基的酸碱、血清等及其敏感，一旦细胞融合后就会增殖缓慢，需要定期从新克隆筛选成肌细胞。
细胞接种密度推荐1X10的4次方每平方厘米。
4) 消化时间的把控也是必不可少的一个步骤,防止未充分消化分散的细胞融合导致成肌管细胞的形成。
