GL261细胞培养传代步骤及常见问题解决方案_abio生物试剂品牌网
细胞简介
GL261细胞是于1939年通过将3-甲基胆蒽颅内注射到C57BL/6小鼠中诱导产生的大脑胶质瘤细胞，在20世纪90年代中期从Gl261肿瘤中建立体外生长细胞。文献报道GL261细胞携带TP53和KRAS突变。
细胞信息
细胞名称：glioma261小鼠神经胶质瘤细胞
别称：Glioma 261; GLIOMA 261; Glioma-261; GL-261
生长特性：成纤维细胞样、贴壁生长
倍增时间：~100-120小时（DSMZ=ACC-802）
细胞培养条件：DMEM（高糖）基础培养基（货号：ZQ-100）+10%FBS（货号：ZQ0500）+1%ps（货号：CSP006）
温度：37℃
换液频次：2~3次/周
传代比例：1:2-1:4（具体情况视实际细胞量决定）
细胞特性：该细胞生长缓慢、培养过程中有漂浮细胞。
传代步骤
吸液：吸出原培养液;
润洗：加入2mL左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出PBS丢弃;
加酶：加入1mL左右0.25%胰蛋白酶溶液（含EDTA），轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞;
消化：放入培养箱消化，显微镜下看到细胞回缩细胞变圆、有明显间隙（约2-4min），轻轻晃动培养培养瓶（皿），细胞大部分脱落时直到80%脱落可终止，加入3-5mL含血清的培养基终止消化，吹打细胞3-8下培养瓶使细胞全部脱落；
离心：收集细胞悬液到离心管进行离心，1000rpm/min 5分钟，离心完吸出上清丢弃；
加培养基：加入新鲜培养基，按比例接种到新培养瓶，补足培养基，画8字法混匀细胞，拧松瓶盖或使用透气瓶盖，将培养瓶放回培养箱静置培养，后续观察细胞生长情况。
常见问题
1、当你的细胞收到是如下状态时，该如何处理?
运输会导致该细胞皱缩，脱落、聚集等情况，当收到细胞皱缩、脱落时，可以先喷酒精，擦拭干净细胞瓶表面。放入培养箱静止2-4h,一般静置后细胞会恢复，细胞会再次贴壁。在密度没有达到80%的时候可以把培养基吸出。添加完全培养基继续培养，次日观察。当细胞密度有80%以上且部分细胞堆积时，可按照上面步骤进行传代，一般传代后细胞会恢复。
2、培养过程中有碎片、黑点变多、液体变浓稠
GL261细胞具有达尔顿抗原neu转化基因，p815蛋白质与胶质母细胞瘤密切相关，p185与表皮生长因子受体在血清受体血学上相似，具有分泌功能，分泌物质是浓稠的1.1、所以细胞培养过程中培养基会变浓稠，换液时能明显感受到液体会有拉丝的情况，特别是细胞密度高换液时候较明显。
2.1细胞凋亡后会产生一些分泌物的沉积和碎片物质，在显微镜下呈黑点状。属于正常现象；
2.2 该细胞生长过程中，培养基中始终有少量漂浮的细胞及碎片，背景中可看到少量黑点，换液可暂时改善，但继续培养漂浮细胞仍会出现。这是细胞特性无法避免。以上都是常见现象，不影响细胞增殖和实验；
3、生长缓慢
细胞生长偏慢时，可以提高5-10%血清浓度（血清总浓度不超过 20%）培养一段时间，待细胞状态和生长速度恢复正常后换回正常血清浓度。
4、漂浮细胞太多
该细胞贴壁展开较慢，个体较大，复苏、传代24h后大部分细胞呈不规则多边形或圆形，细胞形态未完全展开，此时不用换液处理，48h后可见细胞开始成片聚集生长；新复苏培养细胞，可见较多漂浮，复苏48h内可先不换液，保留漂浮细胞继续贴壁；如果传代后贴壁细胞少，或贴壁不牢固，可购买纤连蛋白或多聚赖氨酸包被培养瓶辅助细胞贴壁。
消化传代时，把控好消化时间。吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免造成细胞碎裂增多。
GL261细胞是于1939年通过将3-甲基胆蒽颅内注射到C57BL/6小鼠中诱导产生的大脑胶质瘤细胞，在20世纪90年代中期从Gl261肿瘤中建立体外生长细胞。文献报道GL261细胞携带TP53和KRAS突变。
细胞信息
细胞名称：glioma261小鼠神经胶质瘤细胞
别称：Glioma 261; GLIOMA 261; Glioma-261; GL-261
生长特性：成纤维细胞样、贴壁生长
倍增时间：~100-120小时（DSMZ=ACC-802）
细胞培养条件：DMEM（高糖）基础培养基（货号：ZQ-100）+10%FBS（货号：ZQ0500）+1%ps（货号：CSP006）
温度：37℃
换液频次：2~3次/周
传代比例：1:2-1:4（具体情况视实际细胞量决定）
细胞特性：该细胞生长缓慢、培养过程中有漂浮细胞。
传代步骤
吸液：吸出原培养液;
润洗：加入2mL左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出PBS丢弃;
加酶：加入1mL左右0.25%胰蛋白酶溶液（含EDTA），轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞;
消化：放入培养箱消化，显微镜下看到细胞回缩细胞变圆、有明显间隙（约2-4min），轻轻晃动培养培养瓶（皿），细胞大部分脱落时直到80%脱落可终止，加入3-5mL含血清的培养基终止消化，吹打细胞3-8下培养瓶使细胞全部脱落；
离心：收集细胞悬液到离心管进行离心，1000rpm/min 5分钟，离心完吸出上清丢弃；
加培养基：加入新鲜培养基，按比例接种到新培养瓶，补足培养基，画8字法混匀细胞，拧松瓶盖或使用透气瓶盖，将培养瓶放回培养箱静置培养，后续观察细胞生长情况。
常见问题
1、当你的细胞收到是如下状态时，该如何处理?
运输会导致该细胞皱缩，脱落、聚集等情况，当收到细胞皱缩、脱落时，可以先喷酒精，擦拭干净细胞瓶表面。放入培养箱静止2-4h,一般静置后细胞会恢复，细胞会再次贴壁。在密度没有达到80%的时候可以把培养基吸出。添加完全培养基继续培养，次日观察。当细胞密度有80%以上且部分细胞堆积时，可按照上面步骤进行传代，一般传代后细胞会恢复。
2、培养过程中有碎片、黑点变多、液体变浓稠
GL261细胞具有达尔顿抗原neu转化基因，p815蛋白质与胶质母细胞瘤密切相关，p185与表皮生长因子受体在血清受体血学上相似，具有分泌功能，分泌物质是浓稠的1.1、所以细胞培养过程中培养基会变浓稠，换液时能明显感受到液体会有拉丝的情况，特别是细胞密度高换液时候较明显。
2.1细胞凋亡后会产生一些分泌物的沉积和碎片物质，在显微镜下呈黑点状。属于正常现象；
2.2 该细胞生长过程中，培养基中始终有少量漂浮的细胞及碎片，背景中可看到少量黑点，换液可暂时改善，但继续培养漂浮细胞仍会出现。这是细胞特性无法避免。以上都是常见现象，不影响细胞增殖和实验；
3、生长缓慢
细胞生长偏慢时，可以提高5-10%血清浓度（血清总浓度不超过 20%）培养一段时间，待细胞状态和生长速度恢复正常后换回正常血清浓度。
4、漂浮细胞太多
该细胞贴壁展开较慢，个体较大，复苏、传代24h后大部分细胞呈不规则多边形或圆形，细胞形态未完全展开，此时不用换液处理，48h后可见细胞开始成片聚集生长；新复苏培养细胞，可见较多漂浮，复苏48h内可先不换液，保留漂浮细胞继续贴壁；如果传代后贴壁细胞少，或贴壁不牢固，可购买纤连蛋白或多聚赖氨酸包被培养瓶辅助细胞贴壁。
消化传代时，把控好消化时间。吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免造成细胞碎裂增多。
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