2013 年细胞囊泡运输调节机制获得诺贝尔医学或生理奖，外泌体也成为生物医学领域研究的热点。 外囊泡Extracellular Vesicles (EVs)广泛存在原核及真核细胞中，EVs大致可分为Ectosomes和Exosomes。Ectosomes是通过向外出芽夹在质膜表面的囊泡，包括微囊泡、微粒和直径约为50 nm～1 mm的大囊泡。Exosomes是40至160 nm（平均约100 nm）的EV，具有内泌体来源。 外泌体包含DNA、RNA、脂质、代谢物以及胞质和细胞表面蛋白等。 其产生主要原因可能从细胞中清除过量和/或不必要的成分，以维持细胞内稳态。
 
图1：外泌体的形成及分类 外泌体与肿瘤免疫，神经退行性疾病，心血管疾病等进展有关，调节复杂的细胞通路内在特性并推进在疾病治疗控制中潜在效果。
 
外泌体被改造成递送不同的治疗有效负荷，包括短干扰RNA、反义寡核苷酸、化疗药物和免疫球蛋白。 外泌体的脂质和蛋白质组成可影响其药代动力学特性 ，其天然成分可能在增强生物利用度和最小化不良反应中发挥作用。除了具有治疗潜力，在诊断检测中也有应用， 基于外泌体的液体活检突出了其在诊断和确定癌症和其他疾病患者预后方面的潜在效用 ，疾病进展和治疗反应也可以通过外泌体的多组分分析来确定。  
  如何来提取及检测外泌体？
  外泌体的分离方法通常包括密度梯度离心、 差速离心 、体积排阻、免疫分离等方法
外泌体检测目前没有单一的方法能够完全满足 EV 表征的所有要求。为了全面表征 EV，建议提供三组数据：（1）浓度和粒径分布；（2）形态分析；（3） 蛋白质组成分析（如蛋白质免疫印迹法）。常用的 外泌体标志蛋白 包括 CD9 、 CD81 、 TSG101, Alix ， Flotillin-1 ， HSP70 等 。此外，还应包括总蛋白质和总 RNA 等质量控制数据，以支持下游的组学分析。
  图2. 外泌体的表征及功能
 
     默克在外泌体研究领域有完整解决方案，
涵盖从前期样本处理，
外泌体提取及外泌体检测全流程
 
1 ． 样本前处理
  微滤： 0.22μm 过滤器对细胞上清液过滤以去除一些微囊泡（100-1000nm）和额外的死细胞碎片（0.1-10μm）。
产品组推荐：
  PES 无菌针式滤器（绿色）  代表货号 SLGPR33RB  

• 过滤速度最快提速50%
• 纳污能力强，拒绝堵塞
• 低溶出，低蛋白吸附

    PVDF 无菌针式滤器（黄色）代表货号 SLHVR33RB  

• 低蛋白吸附滤器代表
• 含蛋白成分溶液过滤最优选
• 水溶液及温和有机样品过滤

   2 ． 外泌体提取
  超滤富集细胞外囊泡：使用Amicon ^®  Ultra 100 kDa 截留分子量过滤器超滤离心，再做样本收集。
超滤管产品组推荐：
  Amicon^® Ultra 100 kDa 超滤管， Millipore , UFC9100
Amicon^® Ultra 3 kDa 超滤管， Millipore, UFC9003
 

• 高回收率，样本损失少：Ultracel^® 再生纤维素超滤膜，截留精准，低吸附，>90% 回收率
• 不易堵塞，更快过滤：双侧竖膜切向流设计，最少仅需10分钟
• 热封技术，避免污染：不使用粘合剂，防止溶出物污染影响后续分析结果
• 性能稳定，数据可靠：一体化设计，合理死体积，数据平行性、重现性好

    3 ． 外泌体检测 （ WB 检测）
  ZooMAb ^® 重组抗体对外泌体常见标志物进行检测，更精准表征。
  产品组推荐： ZooMAb^® 重组单克隆抗体  

• 高特异性及批间一致性：HEK293 细胞中重组表达，不含抑菌剂或动物来源的防腐剂（如BSA），用于体内和体外应用。
• 3种以上应用验证:  多重筛选获得高亲和力、高特异性的克隆，每种抗体经过3 种以上应用验证，如WB，IHC，IF，ELSIA 等，一支抗体解决多种应用需求。
• 工艺升级：独特的冻干粉形式，储存更便捷。提供25 UL 或4x25 UL 包装，无需再分装或反复冻融。

  表1： 从ExPI293上清液中提取的细胞外囊泡蛋白质标志物的WB结果
  备注：MERCK生物应用开发培训实验室内部检测数据，仅供参考，默克对数据有最终解释权

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